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(無題) 削除/引用 No.58-3 - 2012/01/21 (土) 23:15:25 - AUT もともと酸性だし、SDS もついてないのだから、転写に先立つゲルの平衡化が不十分だと転写効率は大きく落ちる。結果としてかなりの蛋白質が転写されずゲルに残るので、シグナルが弱いのだろう。ゆえにゲルの平衡化は低濃度のSDSを含む転写buffer中で何回か液換えながらに念入りに行う必要があるだろう。液量も十分多めにして、たとえば外液は10~15minおきに換えるとしてトータル30min~1hr (or more)くらい。外液のpHもチェックしたほうがいい。ある程度長く平衡化してもポリアクリルアミドゲル中の蛋白質はそんなに簡単には拡散しないからあまり心配しなくていい。

(無題) 削除/引用 No.58-2 - 2012/01/20 (金) 18:04:07 - mon 酸尿素ゲルの経験はありませんが、ゲルから膜へのタンパクの転写効率が同じことは確認されていますでしょうか。Prestained markerが酸尿素ゲルからの転写の効率確認に使えると簡単ですけど。 酸尿素ゲルの転写の際に、ゲル内溶液をしっかりと転写bufferに置換してから転写反応？を行なうとか。

論文検索と酸尿素ゲルについて 削除/引用 No.58-1 - 2012/01/19 (木) 18:18:22 - K SDS-PAGEとAUT-PAGE後のウェスタンブロットの違いについて 関連した論文の検索方法や違いがでる原因について 教えてください。 SDSゲルと酸尿素ゲルで同じサンプルを泳動して ウェスタンブロットで検出すると、酸尿素ゲルのほうが シグナルが弱くなる現象に困っています。 普段google scholarでAUT・SDS・westernなどキーワードを 入力して論文を検索して調べているのですが、 上記の現象について関連した論文が出ていないか調べるには どのような方法が最適でしょうか？ 調べている内容がピンポイントなので検索キーワードも浮かばないし そもそも検索できるものなのかなぁと… (AUT-PAGEとウェスタンを組み合わせている論文はいくつか読んだのですが シグナルが弱くなるなどの記述は見つかりませんでした。)

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