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ミニチューブでの細胞一時培養 トピック削除
No.5842-TOPIC - 2017/03/16 (木) 16:12:22 - Qichi
in vitroにて、エフェクター細胞とがん細胞を、遠心して接触させた上でインキュベートし、がん細胞を傷害させる実験を考えています。

いつもなら96 well U底プレートで行いLDHアッセイへと移るのですが、今回はその後フローサイトで分析する予定です。その都合上、サンプルあたりの体積を増やしたいのでミニチューブに細胞を入れて遠心、インキュベートしたいと考えています。

この際、密閉されてしまうために細胞が死ぬ、等の不都合は生じますでしょうか。ご経験のある方、ご教授願えますと幸いです。
 
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(無題) 削除/引用
No.5842-5 - 2017/03/18 (土) 04:08:23 - ものくろ
当方、間葉系幹細胞より軟骨細胞への分化誘導実験を行なっていますが、その際の分化誘導法にはペレット法というものがあります。

具体的には、トリプシン処理した間葉系幹細胞を15mlに移し、遠心したのち、上清を捨て、コンドロジェニック培地を加えて3週間培養するというものです。この間、ペレットは壊さずです。

培地は500マイクロリットルほどですが、15mlチューブの蓋を緩めて培養しています。
これだけでも十分ガス交換できるのでしょうか、一応は軟骨は出来上がっています。参考まで。

何時間か 削除/引用
No.5842-4 - 2017/03/17 (金) 09:32:44 - ema
CTLAssayなどで4時間程度の共培養なら、ファルコン5ml(キャップあり)にして1段階目の蓋(2段階でしっかりしまる)だとそれなりにガス交換が行えて、RI使用のころやったことがあります。。ちなみに96U底でなくても24穴遠心でも接触すると思うのですが。マクロファージ、B cell、Tcell Allo反応の時行ったことがあります。

(無題) 削除/引用
No.5842-3 - 2017/03/16 (木) 22:20:39 - サンショウウオ
予め培地を、インキュベーター内のCO2で平衡化しておいたほうがいいです。

(無題) 削除/引用
No.5842-2 - 2017/03/16 (木) 16:22:26 - おお
密閉されていてCO2のバランスが保てているなら、維持培養はできると思います。

ミニチューブでの細胞一時培養 削除/引用
No.5842-1 - 2017/03/16 (木) 16:12:22 - Qichi
in vitroにて、エフェクター細胞とがん細胞を、遠心して接触させた上でインキュベートし、がん細胞を傷害させる実験を考えています。

いつもなら96 well U底プレートで行いLDHアッセイへと移るのですが、今回はその後フローサイトで分析する予定です。その都合上、サンプルあたりの体積を増やしたいのでミニチューブに細胞を入れて遠心、インキュベートしたいと考えています。

この際、密閉されてしまうために細胞が死ぬ、等の不都合は生じますでしょうか。ご経験のある方、ご教授願えますと幸いです。

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