Bio Technical フォーラム

  • バイオ関連の実験をする上での、試薬、機器、プロトコールなどの情報交換の場です。
  • 新しいテーマで話を始める場合、質問をする場合は「新しいトピックを作る」から書き込みをしてください。
  • 質問に対して解答できる方は是非、書き込んで下さい。
  • このフォーラムにふさわしくないと管理人が判断した投稿は予告なく削除します。

新しいトピックを作る | トピック一覧 | 研究留学ネットに戻る

ひとつ前のフォーラム(readのみ)

このスレッドをはてなブックマークに追加このスレッドをはてなブックマークに追加

マウス脳の脱水について トピック削除
No.5862-TOPIC - 2017/03/28 (火) 23:31:58 - FG
マウスの脳のパラフィン切片を作成しているのですが、
切るとヒビが入ってしまい、脱水がうまくいっていないのではないかと考えています。

PBSで脱血後4%PFAにて灌流固定し、脳を7mm程度にブレインスライサーで切って10%NBFでO.N.後に手動で下記の脱水をしています。

PBS (45min)
PBS (45min)
70%EtOH (1h)
80%EtOH (1h)
90%EtOH (1h)
95%EtOH (1h)
99.5%EtOH (1h)
99.5%EtOH (1h)
99.5%EtOH (1h)
キシレン (1h)
キシレン (1h)
パラフィン (1h)
パラフィン (1h)
その後冷やしてブロック化

脱水についてご教授ください。
よろしくお願いいたします。
 
- このトピックにメッセージを投稿する -



4件 ( 1 〜 4 )  前 | 次  1/ 1. /1


(無題) 削除/引用
No.5862-4 - 2017/03/31 (金) 14:53:24 - FG
ご回答ありがとうございます。
薄切際に工夫してみます。

今日から70%の時間を長くして試してみます。
ありがとうございます。

(無題) 削除/引用
No.5862-3 - 2017/03/31 (金) 12:56:38 - AA
脳の大きさにもよりますが、水がアルコールと置換されていないと
ひびが入りやすくなることがあるようで、
はじめの70%EtOHの時間を伸ばすと劇的に改善したことがあります。

私の場合は丸のままの脳でしたが、1週間位つけてました。
1週間はやりすぎだと思いますが、1日から数日つけておくと良いかもしれません

(無題) 削除/引用
No.5862-2 - 2017/03/31 (金) 09:35:01 - PD
組織の処理については人任せなので何とも言えませんが、薄切時にひびが入る場合、
・剃刀は新しいものを使用
・氷の上に金属トレーを乗せたものでブロックをあらかじめ冷やしておく
・薄切前に断面に少しはぁーっと息を吹きかける

などするとうまくいったりします。

マウス脳の脱水について 削除/引用
No.5862-1 - 2017/03/28 (火) 23:31:58 - FG
マウスの脳のパラフィン切片を作成しているのですが、
切るとヒビが入ってしまい、脱水がうまくいっていないのではないかと考えています。

PBSで脱血後4%PFAにて灌流固定し、脳を7mm程度にブレインスライサーで切って10%NBFでO.N.後に手動で下記の脱水をしています。

PBS (45min)
PBS (45min)
70%EtOH (1h)
80%EtOH (1h)
90%EtOH (1h)
95%EtOH (1h)
99.5%EtOH (1h)
99.5%EtOH (1h)
99.5%EtOH (1h)
キシレン (1h)
キシレン (1h)
パラフィン (1h)
パラフィン (1h)
その後冷やしてブロック化

脱水についてご教授ください。
よろしくお願いいたします。

4件 ( 1 〜 4 )  前 | 次  1/ 1. /1


パスワードを入力してチェックした記事を チェックした記事を

このトピックにメッセージを投稿する
名前 
メール   アドレス非公開
   タイトル 
本文      
設定  クッキーを保存(次回の入力の手間を省けます)
上に上げない(トピックの一覧で一番上に移動させません)
解決(問題が解決した際にチェックしてください)
暗証  半角英数字8-12文字の暗証番号を入れると、あとで削除、修正ができます。
送信 

〔使い方〕
  • 「アドレス非公開」をチェックすれば、自分のメールアドレスを公開しないで他の方からメールを受け取れます。
  • 問題が解決した際には、解決ボタンをチェックして解決した旨のコメントをつけてください。これは、初めにトピックを作った人と管理人のみが可能です。
  • 半角カタカナ、機種依存文字(全角ローマ数字、○の中の数字等)は文字化けの原因となりますので使わないでください。