Bio Technical フォーラム

  • バイオ関連の実験をする上での、試薬、機器、プロトコールなどの情報交換の場です。
  • 新しいテーマで話を始める場合、質問をする場合は「新しいトピックを作る」から書き込みをしてください。
  • 質問に対して解答できる方は是非、書き込んで下さい。
  • このフォーラムにふさわしくないと管理人が判断した投稿は予告なく削除します。

新しいトピックを作る | トピック一覧 | 研究留学ネットに戻る

ひとつ前のフォーラム(readのみ)

このスレッドをはてなブックマークに追加このスレッドをはてなブックマークに追加

自作カラム トピック削除
No.5953-TOPIC - 2017/05/01 (月) 10:57:03 - apes
いつも参考にさせていただいております。

大腸菌を用いてHis-tagを付加した組換えタンパク質を発現分泌させ、
培養液からNi-NTAのレジンを利用してバッチ法で回収したいと
考えています。最終的にレジンをカラムに回収し、洗浄、溶出を
行いたいのですが、数・回数が多くなりそうで、エンプティーカラムを
購入して利用するのにお金が結構掛かってしまいます。

以前、イオン交換樹脂を注射筒に詰めてカラムとして利用していましたが、
Ni-NTAレジンでも同様のことが可能なのでしょうか。

注射筒を利用する場合は、先端に詰めるもの(フリット?)は何を
利用すべきでしょうか。レジンは90マイクロメートル径のものを
利用する予定です。

以上、ご存じの方がおられましたらご教授いただければ幸甚です。
どうぞよろしくお願いいたします。
 
- このトピックにメッセージを投稿する -



8件 ( 1 〜 8 )  前 | 次  1/ 1. /1


自作カラム 削除/引用
No.5953-8 - 2017/05/01 (月) 19:32:35 - apes
qq 様

アドバイスありがとうございます。
さほどの微量ではありませんので、お教えいただいたフィルターを
試してみます。

mon 様

検証するバリエーションが多いので、培地に直接レジンを
入れようと考えていました。検討いたします。
ご意見ありがとうございました。

(無題) 削除/引用
No.5953-7 - 2017/05/01 (月) 14:45:13 - mon
なお、ペリプラズム抽出液の場合は問題ないです。

(無題) 削除/引用
No.5953-6 - 2017/05/01 (月) 14:44:08 - mon
質問とは直接関係ないですが、培地成分(アミノ酸)によりNiカラムへのHisタグタンパクの結合が阻害されますので、予備的検討を行ってください。NiカラムからNiが外れるときもあります。
培養上清が多い場合は硫安沈殿等(または、pH6程度に調整してHisTagを利用した陽イオン交換カラムでのバッチ処理など)で前処理が必要です。

(無題) 削除/引用
No.5953-5 - 2017/05/01 (月) 14:34:05 - qq
大腸菌抽出液をロードするのでしょうから、その時点で吸着・ブロッキングができていると思います。
超微量タンパク質を扱っているのでなければ、吸着のロスを問題視する必要はないだろうと思います。

自作カラム 削除/引用
No.5953-4 - 2017/05/01 (月) 13:35:59 - apes
編集途中で送信してしまいました。申し訳ありません。
qq 様、早速のご返信ありがとうございました。

Whatman GF/Dフィルタを利用されているとのことですが、
フィルタのタンパク質の吸着は特に問題ありませんでしょうか。

自作カラム 削除/引用
No.5953-3 - 2017/05/01 (月) 13:31:20 - apes

(無題) 削除/引用
No.5953-2 - 2017/05/01 (月) 11:33:42 - qq
>注射筒を利用する場合は、先端に詰めるもの(フリット?)は
>何を利用すべきでしょうか。

Whatman GF/Dフィルタを使っています。注射筒をフィルタに強く押し当てて、押し当てた輪郭に沿って丸く抜き出して使います。

自作カラム 削除/引用
No.5953-1 - 2017/05/01 (月) 10:57:03 - apes
いつも参考にさせていただいております。

大腸菌を用いてHis-tagを付加した組換えタンパク質を発現分泌させ、
培養液からNi-NTAのレジンを利用してバッチ法で回収したいと
考えています。最終的にレジンをカラムに回収し、洗浄、溶出を
行いたいのですが、数・回数が多くなりそうで、エンプティーカラムを
購入して利用するのにお金が結構掛かってしまいます。

以前、イオン交換樹脂を注射筒に詰めてカラムとして利用していましたが、
Ni-NTAレジンでも同様のことが可能なのでしょうか。

注射筒を利用する場合は、先端に詰めるもの(フリット?)は何を
利用すべきでしょうか。レジンは90マイクロメートル径のものを
利用する予定です。

以上、ご存じの方がおられましたらご教授いただければ幸甚です。
どうぞよろしくお願いいたします。

8件 ( 1 〜 8 )  前 | 次  1/ 1. /1


パスワードを入力してチェックした記事を チェックした記事を

このトピックにメッセージを投稿する
名前 
メール   アドレス非公開
   タイトル 
本文      
設定  クッキーを保存(次回の入力の手間を省けます)
上に上げない(トピックの一覧で一番上に移動させません)
解決(問題が解決した際にチェックしてください)
暗証  半角英数字8-12文字の暗証番号を入れると、あとで削除、修正ができます。
送信 

〔使い方〕
  • 「アドレス非公開」をチェックすれば、自分のメールアドレスを公開しないで他の方からメールを受け取れます。
  • 問題が解決した際には、解決ボタンをチェックして解決した旨のコメントをつけてください。これは、初めにトピックを作った人と管理人のみが可能です。
  • 半角カタカナ、機種依存文字(全角ローマ数字、○の中の数字等)は文字化けの原因となりますので使わないでください。