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FACS用の細胞保存 トピック削除
No.5998-TOPIC - 2017/05/25 (木) 23:27:49 - 駆け出し大学院生
手術検体の組織をcell dissociation bufferなどで、細胞単位にばらばらにして、FACSで細胞表面抗原の発現を解析しています。
中々時間や試薬の関係上、後で又解析したいということもありまして。。。

細胞液を、cell bankerなどで、凍結保存したものを、その後、FACSの解析に用いることは、実験上、問題ないでしょうか??どのような問題が生じる可能性がありますでしょうか?
(細胞の生存率は低くなると思いますが、死細胞除去などで対応したとして)
細胞表面抗原にも、影響を及ぼす可能性もあると思いますが、、、

このようにして解析をされている方、いらっしゃいますでしょうか??
 
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固定方法 削除/引用
No.5998-5 - 2017/06/04 (日) 14:45:49 - 駆け出し大学院生
因みにFACS解析用細胞の固定は4%PFAでしょうか??染色後だったらいいですが、染色後だったら固定による影響が確かに気になりますね。。。

御礼 削除/引用
No.5998-4 - 2017/06/04 (日) 14:44:22 - 駆け出し大学院生
有難う御座います。

今後、追加で解析する抗原が出た場合を考慮してのことでした。
あまり、FACS解析用に細胞の凍結による保存は一般的ではないようですね。Bossにも、あまりしない方がいいのでは進言されました。。。

しかし気になりますので一度、Xさんの言う通り、凍結した細胞で解析をして、新鮮細胞との比較をしてみます。

(無題) 削除/引用
No.5998-3 - 2017/05/28 (日) 06:03:10 - X
私自身は、一回凍結した細胞を解凍してFACS用の抗体染色するのはちょっと抵抗があるのでやりませんが、どうしても必要であれば、一回、サンプルを二つに分けて、直接染色した場合と、一回凍結した場合で、どれくらい差があるか見てみると良いと思います。その差が許容範囲内と判断されれば、凍結しても良いかもしれませんが、その場合は、すべてのサンプルを同一の処理法(凍結するなら、今後すべてのサンプルを凍結する)で解析する方が無難と思います。

私だったら、前の方と同様、凍結ではなく固定する方を選ぶと思いますが、できれば頑張って抗体染色まではやってから固定し、FACS解析だけ後回しにします。一回固定すると、抗体によっては染色性がかなり変わるので、無染色で固定する場合は、上記と同様、一回サンプルを分けて、前固定した場合どれくらい染色が変わるか見てから判断します。抗体によっては、固定しても大丈夫かもしれませんので、ケースバイケースになると思います。

(無題) 削除/引用
No.5998-2 - 2017/05/25 (木) 23:56:32 - ふ
普通は細胞を染色後に固定をして、そのまま4度にぶち込んだ後、翌日解析というのがよくやられることだと思います。

FACS用の細胞保存 削除/引用
No.5998-1 - 2017/05/25 (木) 23:27:49 - 駆け出し大学院生
手術検体の組織をcell dissociation bufferなどで、細胞単位にばらばらにして、FACSで細胞表面抗原の発現を解析しています。
中々時間や試薬の関係上、後で又解析したいということもありまして。。。

細胞液を、cell bankerなどで、凍結保存したものを、その後、FACSの解析に用いることは、実験上、問題ないでしょうか??どのような問題が生じる可能性がありますでしょうか?
(細胞の生存率は低くなると思いますが、死細胞除去などで対応したとして)
細胞表面抗原にも、影響を及ぼす可能性もあると思いますが、、、

このようにして解析をされている方、いらっしゃいますでしょうか??

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