Bio Technical フォーラム

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マイクロプレートリーダーを用いたTrp蛍光測定 トピック削除
No.6000-TOPIC - 2017/05/26 (金) 19:00:01 - 大腸菌の発現
かなり初歩的な質問なのですが,
お付き合い願います
蛍光測定も初めてで,周囲に経験者もいません

タンパク質のフォールディングを調べるために
マイクロプレートリーダーを用いてTrpの蛍光波長のシフト(300-450 nm)と
強度を測定しようと思います。この際に・・・

@励起光の290 nmがマイクロプレートのプラスチックに吸収されることは
実験の上では問題ないのか?専用のプレートを購入すべきでしょうか?
(相対的な強度がわかればいいから問題ない?)

Aブランクの値がサンプル値を上回ることはあるでしょうか?
 
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(無題) 削除/引用
No.6000-4 - 2017/05/28 (日) 18:13:09 - 大腸菌の発現
おおさん ご返答ありがとうございます

>Wellの活性が非常に高ければ
気を付けてみようかと思います

>蛍光用の真っ黒なプレート
恥ずかしながら知りませんでした。
明らかにこっちがいいので検討してみます。

(無題) 削除/引用
No.6000-3 - 2017/05/27 (土) 05:19:36 - おお
ちなみに蛍光用の真っ黒なプレートがあるのはご存知ですよね。
https://www.google.com/search?q=black+microplate+for+fluorescence&source=lnms&tbm=isch&sa=X&ved=0ahUKEwioqeLQsI7UAhUM34MKHe3JBmAQ_AUICygC&biw=1064&bih=889

(無題) 削除/引用
No.6000-2 - 2017/05/27 (土) 04:28:50 - おお
350nmあたりならなんとかなるようですが、290nmになるとちょっと厳しいかも、と思いましたが蛍光測定なので励起光が上から当たるのなら問題はなさそうです。蛍光も上から拾うならプラスティックの吸収もないでしょう。

ただし透明なマイクロプレートは光が横に拡散するのでバックグランドが結構高くなるのではないかな、となりのWellの活性が非常に高ければそこからのシグナルも拾ってしまうかもと思います。

マイクロプレートリーダーを用いたTrp蛍光測定 削除/引用
No.6000-1 - 2017/05/26 (金) 19:00:01 - 大腸菌の発現
かなり初歩的な質問なのですが,
お付き合い願います
蛍光測定も初めてで,周囲に経験者もいません

タンパク質のフォールディングを調べるために
マイクロプレートリーダーを用いてTrpの蛍光波長のシフト(300-450 nm)と
強度を測定しようと思います。この際に・・・

@励起光の290 nmがマイクロプレートのプラスチックに吸収されることは
実験の上では問題ないのか?専用のプレートを購入すべきでしょうか?
(相対的な強度がわかればいいから問題ない?)

Aブランクの値がサンプル値を上回ることはあるでしょうか?

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