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MACS(免疫磁器細胞分離)のカラムが詰まる トピック削除
No.6031-TOPIC - 2017/06/08 (木) 16:14:40 - 分離分
組織からCD31陽性細胞をMACSで分離しようとしているのですが、MACSのカラムが途中で詰まってしまうことがあります。

説明書にはカラムをフラッシュするときは、一度完全に流し切ってから、次のバッファーをカラムに入れてフラッシュすることと書いてあります。皆さんも、バッファーでカラムを洗浄して、ポジティブ分離するとき、ちゃんとバッファーを流し切ってから次のバッファーを入れているでしょうか?

個人的にですが、バッファーを完全に流し切ってから、次のバッファーを入れた場合、カラムに空気が入って詰まってしまうのではないかと、考えています。この前一度だけですが、前のバッファーを完全に流し切る前に、次のバッファーを入れたところ、詰まりませんでした。(再現性はまだ確認しておりません)

皆さんの中で、カラムが詰まってしまった経験のある方、また、つまらなくなるようなコツをご存知の方がおりましたら、その手法を教えていただきたいです。

なお、バッファーの脱気は行っております。また細胞はカラムに通す前に、40μのメッシュを通しております。

どうぞよろしくお願いいたします。
 
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(無題) 削除/引用
No.6031-4 - 2017/06/09 (金) 23:41:11 - Tarai
miniMACS(マニュアル)を普段使用しているものです。
分離純度を上げるためbufferは毎回(自然落下で)流しきってから加えていますが、それが原因で詰まったという経験は一度もないです。
組織からの分離だと詰まりやすいことは十分考えられます…可能なら低温で分離するとか、EDTA存在下で分離するとある程度改善されるかもです。メッシュは何回通してもそんなに変わらないですよ。あとは陽性細胞数が多すぎると当然詰まりやすくなります。

(無題) 削除/引用
No.6031-3 - 2017/06/08 (木) 16:36:18 - 分離分
emaさん
説明不足で申し訳ありません、manualMACSでやっております。

やはり組織からのMACSは詰まりやすいんでしょうか・・・
メッシュを通す回数が少なかった(2回)ので、その回数を増やしてみようと思います

目的の細胞が接着細胞なのもカラムに詰まりやすい原因なのかな?とも思っています。

手MACS?AutoMACS? 削除/引用
No.6031-2 - 2017/06/08 (木) 16:23:10 - ema
手MACSは昔、今はAutoMACSで使っています。組織からT,B,NKその他取っていました。
Bufferに関しては私は連続して入れ、流しきったことはないです。普通に使用できていました。
それよりも組織から取ってくるとよく詰まります。
>また細胞はカラムに通す前に、40μのメッシュを通して
とあるのでやってらっしゃると思いますが、
組織から回収し遠沈管に入れるときにメッシュ(2回かけることもある)→ビーズつけ終わったらメッシュ→少し時間を置くなら直線にメッシュ
と3回4回くらいやってました。
それでも私のサンプルはアグリゲードをおこすこともありました。

MACS(免疫磁器細胞分離)のカラムが詰まる 削除/引用
No.6031-1 - 2017/06/08 (木) 16:14:40 - 分離分
組織からCD31陽性細胞をMACSで分離しようとしているのですが、MACSのカラムが途中で詰まってしまうことがあります。

説明書にはカラムをフラッシュするときは、一度完全に流し切ってから、次のバッファーをカラムに入れてフラッシュすることと書いてあります。皆さんも、バッファーでカラムを洗浄して、ポジティブ分離するとき、ちゃんとバッファーを流し切ってから次のバッファーを入れているでしょうか?

個人的にですが、バッファーを完全に流し切ってから、次のバッファーを入れた場合、カラムに空気が入って詰まってしまうのではないかと、考えています。この前一度だけですが、前のバッファーを完全に流し切る前に、次のバッファーを入れたところ、詰まりませんでした。(再現性はまだ確認しておりません)

皆さんの中で、カラムが詰まってしまった経験のある方、また、つまらなくなるようなコツをご存知の方がおりましたら、その手法を教えていただきたいです。

なお、バッファーの脱気は行っております。また細胞はカラムに通す前に、40μのメッシュを通しております。

どうぞよろしくお願いいたします。

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