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FACSソーティングに使うバッファー トピック削除
No.6038-TOPIC - 2017/06/08 (木) 22:42:00 - FACSソーティング
みなさん、培養細胞をFACSでソートする場合、どのように細胞を準備しているでしょうか?

私は細胞をPBSでウォッシュ後、5mM EDTA/PBSで細胞を剥がし、その後40-50umのフィルターを使ってソートに持っていきます。その間、細胞懸濁液は氷冷してます。
しばらく時間が経つと、細胞が凝縮してチューブの底に溜まってしまいます。

同じ問題を抱えたことのある人いませんでしょうか?
5mM EDTA/PBSではなく血清など入れておくべきなのでしょうか??

オススメの試薬、バッファー等あれば教えてください
 
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(無題) 削除/引用
No.6038-4 - 2017/06/09 (金) 09:29:29 - ごん
FBSかBSAは入れてもいいと思います。

ところで細胞が凝縮して底に溜まっていると書いてありますが、それは細胞同士がくっついてしまっているのですか?ただ沈殿しているだけなのでは?それならば、定期的にチューブを振盪するか、ピペッティングすれば問題ないんじゃないでしょうか?それか直前にもう一度メッシュを通すとか。

FACSで計測またはソートするときは、直前にメッシュを通すのは原則ですので。参考までに

(無題) 削除/引用
No.6038-3 - 2017/06/09 (金) 00:53:13 - FACSソーティング
trackerさん

ありがとうございます。
差し支えなければ、細胞を剥がす時は何を使っているか教えていただけますか?

(無題) 削除/引用
No.6038-2 - 2017/06/08 (木) 23:17:47 - tracker
培養に使ってる培地で懸濁しています

FACSソーティングに使うバッファー 削除/引用
No.6038-1 - 2017/06/08 (木) 22:42:00 - FACSソーティング
みなさん、培養細胞をFACSでソートする場合、どのように細胞を準備しているでしょうか?

私は細胞をPBSでウォッシュ後、5mM EDTA/PBSで細胞を剥がし、その後40-50umのフィルターを使ってソートに持っていきます。その間、細胞懸濁液は氷冷してます。
しばらく時間が経つと、細胞が凝縮してチューブの底に溜まってしまいます。

同じ問題を抱えたことのある人いませんでしょうか?
5mM EDTA/PBSではなく血清など入れておくべきなのでしょうか??

オススメの試薬、バッファー等あれば教えてください

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