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便中脂質抽出 トピック削除
No.6104-TOPIC - 2017/07/04 (火) 20:37:41 - KS
マウスの便中の脂質を抽出し、中性脂肪、コレステロール、脂肪酸をWakoのキットで測定したいのですが、高脂肪食+投薬群のサンプルのみ、クロロホルム/メタノール(2:1)で抽出した際に上部にクリーム状の層を認めました(コントロール食、高脂肪食では認めませんでした)。
脂質の量が多く溶解しきれない可能性を考え、便の量を1/5に減らしましたが、やはりクリーム状の層を認めました(溶媒1mlに対して便20mg程度です)。
このクリーム状の層は脂質なのでしょうか?
クロロホルムに溶けない脂質は存在しますでしょうか?
ご存じの方がおられましたらご意見頂けますと幸いです。
 
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No.6104-7 - 2017/07/05 (水) 20:31:14 - KS
多数のアドバイスありがとうございます。
水を加えたときに中間層にくれば蛋白質である可能性が高くなるのですね。
やってみます。

(無題) 削除/引用
No.6104-6 - 2017/07/05 (水) 20:23:20 - 菜々氏
SKさんのいうように、投薬群のみ水/メタノール層が白く濁っているのではないでしょうか。

(無題) 削除/引用
No.6104-5 - 2017/07/05 (水) 20:15:02 - 菜々氏
私も時々同じ方法で組織や糞の脂質抽出を行います。
クロロホルム層 (下層) と水/メタノール層 (上層) の中間に、タンパク質等の不溶物の層ができます。
不溶物をどけると、上層と下層の境目がみえます。(但し糞の場合、不溶物の層がもろいので注意)

(無題) 削除/引用
No.6104-4 - 2017/07/05 (水) 20:05:56 - SK
糞便にも水分が含まれていますので水層(上層)と中間層が区別でき
ないエマルジョンのように見えるんでしょうね。
水を加えて中間層に来るのがタンパク質ではないでしょうか。

(無題) 削除/引用
No.6104-3 - 2017/07/05 (水) 19:19:25 - KS
ご指摘ありがとうございます。
変性した蛋白質が遠心後、比重的にクロロホルム/メタノールよりも上層にくることはあるのでしょうか?

(無題) 削除/引用
No.6104-2 - 2017/07/04 (火) 22:57:17 - うーん
変性したタンパク質ではありませんか?

便中脂質抽出 削除/引用
No.6104-1 - 2017/07/04 (火) 20:37:41 - KS
マウスの便中の脂質を抽出し、中性脂肪、コレステロール、脂肪酸をWakoのキットで測定したいのですが、高脂肪食+投薬群のサンプルのみ、クロロホルム/メタノール(2:1)で抽出した際に上部にクリーム状の層を認めました(コントロール食、高脂肪食では認めませんでした)。
脂質の量が多く溶解しきれない可能性を考え、便の量を1/5に減らしましたが、やはりクリーム状の層を認めました(溶媒1mlに対して便20mg程度です)。
このクリーム状の層は脂質なのでしょうか?
クロロホルムに溶けない脂質は存在しますでしょうか?
ご存じの方がおられましたらご意見頂けますと幸いです。

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