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(無題) 削除/引用 No.6144-3 - 2017/07/22 (土) 08:24:14 - Ito PYKさま ありがとうございます。私もおっしゃる通りと思っておりました。 ただLPDSを用いると細胞増殖はstopされてしまうと思い、コレステロール合成異常に伴う細胞増殖能の変化やapoptosisなどを観察したい場合はどのような手段を用いるのが良いのかと疑問に思った次第でした。 まず両方の条件でやってみようと思います。

(無題) 削除/引用 No.6144-2 - 2017/07/21 (金) 22:23:06 - PYK 実験の目的にもよると思うのですが、コレステロールの輸送や代謝異常を観察する場合、細胞をLPDS(Lipoprotein deficient serum)で培養する必要があります。 ご存知かもしれませんが、コレステロールは細胞内で合成される経路（HMG-CoA還元酵素）と、細胞外から供給される経路（LDLがエンドサイトーシス）があり、ある遺伝子のコレステロールへの影響を観察する場合、どちらか（または両方の）経路を止めてあげなければなりません。 前者はスタチン系の薬剤投与で止められますが、後者はLPDSの培地に置換することで止められます。 Ito様の目的遺伝子は「合成異常」に関与しするということですので、LPDS培地に置換しなければならないと思います。なぜなら、その遺伝子のノックダウンでコレステロールの合成異常が生じても、細胞外からコレステロールを供給可能なので、結果として表現型が弱くしか（もしくは全く）観察されないのでは？

コレステロール合成酵素異常の実験 削除/引用 No.6144-1 - 2017/07/21 (金) 13:12:26 - Ito いつも勉強させていただいております。 現在先天性コレステロール合成酵素異常について、細胞を用いた実験を行なっております。 HaCaT細胞を用いて、関連酵素をノックダウンした細胞株を作成したのですが、報告ではcholesterol difficient cultureを行なっているものや、通常培地(DMEM+10% FBS)で行なっているものがあり、実験の条件につき難渋しております。 もちろん細胞増殖などをみる場合はcholesterolが含まれていないと、細胞増殖が起こらないものと思うのですが、cholesterol difficient cultureでないと、phenotypeが出ないと記載されている論文もあります。 経験ある方がいらっしゃればアドバイスなどいただけますでしょうか。

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