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微生物におけるトランスポゾン変異について トピック削除
No.6151-TOPIC - 2017/07/25 (火) 00:50:01 - bio初心者

微生物におけるトランスポゾン挿入による変異株作製方法について質問です。
よくトランスポゾンによる変異株ライブラリーなどが論文に挙げられていますが、どのように作っているのでしょうか?
@トランスポゾン遺伝子クローニングしたベクターを対象とする野生株に形質転換し、相同組み換えを利用して目的遺伝子にトランスポゾンを挿入しているのでしょうか?
Aあるいは、相同組み換え後ランダムに変異が入り、上手くいった変異株だけがライブラリーに加えられているのでしょうか?
トランスポゾンがどのようにして特異的にDonerとなる遺伝子領域に挿入されているのか、よくわかりません。
大変恐縮ではございますが、わかる方教えてください。
 
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(無題) 削除/引用
No.6151-3 - 2017/07/25 (火) 09:40:56 - mon
トランスポゾンによる変異株ライブラリーとは、ランダムな挿入による遺伝子破壊です。トランスポゾンに薬剤耐性遺伝子が乗っていて、それで挿入された菌株(集団)を選抜します。
相同組み換えでは有りません。トランスポゾンの仕組みを教科書等で読むと良いです。
一部のトランスポゾンは挿入部位にえり好み(コンセンサス配列)が有ります。
ちなみに「相同組み換え」による遺伝子破壊は、トランスポゾンを使わないで、相同配列に挟まれた剤耐性遺伝子発現ユニットだけで成功しますよ。

(無題) 削除/引用
No.6151-2 - 2017/07/25 (火) 02:40:30 - おお
https://link.springer.com/protocol/10.1007%2F978-1-59745-321-9_2
http://www.lucigen.com/EZ-Tn5-KAN-2-Tnp-Transposome-Kit/

微生物におけるトランスポゾン変異について 削除/引用
No.6151-1 - 2017/07/25 (火) 00:50:01 - bio初心者

微生物におけるトランスポゾン挿入による変異株作製方法について質問です。
よくトランスポゾンによる変異株ライブラリーなどが論文に挙げられていますが、どのように作っているのでしょうか?
@トランスポゾン遺伝子クローニングしたベクターを対象とする野生株に形質転換し、相同組み換えを利用して目的遺伝子にトランスポゾンを挿入しているのでしょうか?
Aあるいは、相同組み換え後ランダムに変異が入り、上手くいった変異株だけがライブラリーに加えられているのでしょうか?
トランスポゾンがどのようにして特異的にDonerとなる遺伝子領域に挿入されているのか、よくわかりません。
大変恐縮ではございますが、わかる方教えてください。

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