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(無題) 削除/引用 No.6181-5 - 2017/08/07 (月) 15:23:45 - みなみな みなさん、ありがとうございます。 とりあえず、ポリクローナル抗体でやってみようという話になりました。 また、わからないことが出てきましたら、よろしくお願いします。

(無題) 削除/引用 No.6181-4 - 2017/08/04 (金) 22:25:35 - 統計太郎 まずIPに使える抗体は抗体全体からみると決して多くないです。そのうえで、確率的には認識部位が多いぶんだけpolyclonalの方がmonoclonalやmonospecific よりは当る可能性が高いですが、後者でもIPで優れた能力を示すものも（IPに使うことを念頭に設計時に構造情報などから抗原としてgoodな部域を予測したりしているものなどでは）たくさんあるとおもいます。 経験的には、使えないものはどんなに条件を良くしようとして工夫してもほとんど改善しませんし、使えるものはかなり適当な感じでやってもしっかりIPで来てます。IP可とあっても使えないものは多いですし、何も書いてなくてもIPに使えるものも少なくないです。IP以前に、目指す蛋白質が使っているlysis bufferで十分に可溶化出来ているかどうかは重要です。IPできないと悩んでいる人で、実はその条件では十分に可溶化できていなかったケースは多いです。

(無題) 削除/引用 No.6181-3 - 2017/08/04 (金) 15:32:06 - おお モノはそのエピトープ部分が複合体や立体的な障害でアクセスできなかったらIPできません。確かにポリでもペプチド抗体だったら同じ事が起こるかもしれませんが、モノはペプチドじゃなくってリコンビナントから作ったりもしていて、そういう場合エピトープ部位が明らかになってないケースもあります。 ポリはアフィニティー、デタージェント耐性などの性質も幅がある集団なので、いろいろな条件においてそれぞれ対応できるものが含まれている可能性があります。 IPのあとWBをするのなら、両者の抗体は異種のものがベターということもあります。

(無題) 削除/引用 No.6181-2 - 2017/08/04 (金) 14:29:43 - 独り言 ＩＰできる抗体であれば、どちらでもよいです。よりＩＰ効率のよい抗体を使いましょう。 もしポリもモノも同じくらいの効率であれば、モノのほうが非特異が少なそうな経験があるので、モノかな。

IPするときに適切な抗体 削除/引用 No.6181-1 - 2017/08/04 (金) 13:56:29 - みなみな みなさん、こんにちわ。 細胞を可溶化した後、あるタンパク質に対する抗体で免疫沈降を行いたいと思っています。その際、使用する抗体はポリクローナル抗体がよいのか、モノクローナル抗体がよいのか、教えていただけますか？ よろしくお願いします。

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