Bio Technical フォーラム

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ウエスタンにおけるトランスファー トピック削除
No.626-TOPIC - 2012/06/12 (火) 11:45:25 - noname
ATTOの装置でトランスファーを行なっている方に
質問したいです。

今、ウエスタンで定量(あくまでも半定量ですが)を
行なっているのですが、
ろ紙・メンブレン・ゲル・ろ紙・メンブレン・ゲル・ろ紙
のように2段重ねになるような形でトランスファーを
行なっています。

教えてくれた人いわく、
これで4段重ねくらいまでは大丈夫とのことだったのですが、
定量するような実験では、重ねるのはよくないのでは
ないか?と別の方に指摘を受けました。

1段重ねと2段重ね、比較してみる予定ではありますが、
どう思われますか?やったことあるかたいらっしゃいますか?

ATTOのミニゲル4枚までトランスファーできる装置を
使っていますが、あまり電極のはしっこの方は使いたくないしなあ・・・
とも思います。(トランスファーむらがありそうで・・)
 
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(無題) 削除/引用
No.626-3 - 2012/06/12 (火) 12:40:43 - Q
>教えてくれた人いわく、
これで4段重ねくらいまでは大丈夫とのことだったのですが、
定量するような実験では、重ねるのはよくないのでは
ないか?と別の方に指摘を受けました。

いずれも「感覚的な感想」では?
そんな感覚は人によってどうとでもなると思います。

>1段重ねと2段重ね、比較してみる予定ではありますが、

その結果が一番正しいことかと。

セロハン 削除/引用
No.626-2 - 2012/06/12 (火) 12:06:46 - 梅雨
ミニゲルの濾紙・ゲル・メンブレンセットを真ん中に置いた2段重ねは以前頻繁に行っていました。1枚目のゲル中タンパクが1枚目のメンブレンを通り越して2枚目に行かない様にセロハンを挟んでいました。たしかATTOのManualにも書いてあったと思います。メンブレンはイモビロンPです。
2段重ねまでは、安定した結果を得ています。濾紙は厚めのもの(東洋濾紙526)をカスタムで10cmx10cmでカットしたものをまとめ買いしています。
3段重ねも行なったことがありますが、(不器用で)重ね具合が不安定にならないように重ねるのに疲れたのででやめました。また電極の押さえつけ具合も(ふわふわするので)不安でした。転写自体は成功していましたが。

ウエスタンにおけるトランスファー 削除/引用
No.626-1 - 2012/06/12 (火) 11:45:25 - noname
ATTOの装置でトランスファーを行なっている方に
質問したいです。

今、ウエスタンで定量(あくまでも半定量ですが)を
行なっているのですが、
ろ紙・メンブレン・ゲル・ろ紙・メンブレン・ゲル・ろ紙
のように2段重ねになるような形でトランスファーを
行なっています。

教えてくれた人いわく、
これで4段重ねくらいまでは大丈夫とのことだったのですが、
定量するような実験では、重ねるのはよくないのでは
ないか?と別の方に指摘を受けました。

1段重ねと2段重ね、比較してみる予定ではありますが、
どう思われますか?やったことあるかたいらっしゃいますか?

ATTOのミニゲル4枚までトランスファーできる装置を
使っていますが、あまり電極のはしっこの方は使いたくないしなあ・・・
とも思います。(トランスファーむらがありそうで・・)

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