Bio Technical フォーラム

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PCRのmaster mixの量について トピック削除
No.6260-TOPIC - 2017/08/30 (水) 21:40:05 - 駆け出し大学院生
試薬の節約の関係で、PCRのmaster mixの量をどこまで減らすか考えています。

プロトコールですと1tube50μlとしていますが、25μlにしています。特に問題ないですが、12,5μl、・・・とどこまで減らすのは許容されるのでしょうか。
12.5μlまでは、減らしたいなと思っています。

混ぜにくいという以外で、容量が少なくなると弊害はないか起こりうるでしょうか??
 
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(無題) 解決済み 削除/引用
No.6260-4 - 2017/09/02 (土) 15:01:09 - 駆け出し大学院生
ご回答有難う御座います。

指摘された点に注意して、取り敢えず12.5μlは試そうと思います。

(無題) 削除/引用
No.6260-3 - 2017/08/31 (木) 02:19:16 - おお
10ulくらいでやることはあります。まあ増えればなんとかなるという実験ではありましたので、それ以上を望むなら予めワークするか確かめるなど慎重にする必要があるでしょう。

5uぐらいでやったことはあったかもしれませんが、、、おぼえていません、

(無題) 削除/引用
No.6260-2 - 2017/08/30 (水) 22:24:01 - mon
colony PCRは200uLチューブで5uL(-10uL)で行っています。どうせ泳動は2uLで太すぎるバンドが視認出来ますし。ただしヒートリッド付き装置です。
denatureやannealingが1secで良いので多少の時間短縮になります。
またそのまま泳動できるように反応を阻害しないdye+比重増加剤を入れています。
キャップの閉めが甘い(成形ミス?)と乾燥して無くなります。

PCRのmaster mixの量について 削除/引用
No.6260-1 - 2017/08/30 (水) 21:40:05 - 駆け出し大学院生
試薬の節約の関係で、PCRのmaster mixの量をどこまで減らすか考えています。

プロトコールですと1tube50μlとしていますが、25μlにしています。特に問題ないですが、12,5μl、・・・とどこまで減らすのは許容されるのでしょうか。
12.5μlまでは、減らしたいなと思っています。

混ぜにくいという以外で、容量が少なくなると弊害はないか起こりうるでしょうか??

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