Bio Technical フォーラム

  • バイオ関連の実験をする上での、試薬、機器、プロトコールなどの情報交換の場です。
  • 新しいテーマで話を始める場合、質問をする場合は「新しいトピックを作る」から書き込みをしてください。
  • 質問に対して解答できる方は是非、書き込んで下さい。
  • このフォーラムにふさわしくないと管理人が判断した投稿は予告なく削除します。

新しいトピックを作る | トピック一覧 | 研究留学ネットに戻る

ひとつ前のフォーラム(readのみ)

このスレッドをはてなブックマークに追加このスレッドをはてなブックマークに追加

コンピテントセルのCFUについて トピック削除
No.6263-TOPIC - 2017/08/31 (木) 13:32:39 - CFU
コンピテントセルを自作してみてCFUを計算したところ、5 x 10^6 cfu/μgでした。皆さんは普段どれくらいのCFUのコンピテントセルを使っていますか?
 
- このトピックにメッセージを投稿する -



5件 ( 1 〜 5 )  前 | 次  1/ 1. /1


(無題) 削除/引用
No.6263-5 - 2017/09/02 (土) 07:53:11 - m
18度で培養する方法が良いです。
出来立てで10の8乗が目標。ー80度保存。(液体窒素を買う金ありません。)
7乗以下は数ヶ月でダメになります。
ライゲーションはタカラのキット。
インサート1 ul, ベクター0.5 ul, 試薬1.5 ulでやってます。

(無題) 削除/引用
No.6263-4 - 2017/08/31 (木) 17:28:19 - AP
どこかのテクニカルチップの論文だったか記事だったかで、手抜き形質転換法が紹介されていて、

スモールスケールのO/NカルチャーにCaCl2だったかを加えただけの菌液にライゲーション産物やプラスミドを入れるというのがあった。形質転換効率はかなり低かったと思うがサブクローニングくらいならそれでもいけるってこと。

(無題) 削除/引用
No.6263-3 - 2017/08/31 (木) 17:24:31 - AP
作った直後で10^8 cfu/ug くらい
それをディープフリーザーで保存したもので、時には数年たったものを普段は使っているので1,2ケタオチだと思う。


作った直後で10^6は低いかもしれないけれど使えないレベルじゃないだろう。

形質転換効率を調べるときは、プラスミド量が多過ぎるとcfuとの線形性が無くなる(プラスミドを増やしたほどにはコロニーが増えない)ので、1 ng以下のプラスミドでみるのがいいと思う。

(無題) 削除/引用
No.6263-2 - 2017/08/31 (木) 15:26:06 - おお
10^6〜10^7
昔ながらのフラグメントをプラスミドにライゲーションしてという作業なら、10^6ぐらいならよほど難しいもの出ない限り許容範囲。もちろん高ければ高いほうがいいです。

コンピテントセルのCFUについて 削除/引用
No.6263-1 - 2017/08/31 (木) 13:32:39 - CFU
コンピテントセルを自作してみてCFUを計算したところ、5 x 10^6 cfu/μgでした。皆さんは普段どれくらいのCFUのコンピテントセルを使っていますか?

5件 ( 1 〜 5 )  前 | 次  1/ 1. /1


パスワードを入力してチェックした記事を チェックした記事を

このトピックにメッセージを投稿する
名前 
メール   アドレス非公開
   タイトル 
本文      
設定  クッキーを保存(次回の入力の手間を省けます)
上に上げない(トピックの一覧で一番上に移動させません)
解決(問題が解決した際にチェックしてください)
暗証  半角英数字8-12文字の暗証番号を入れると、あとで削除、修正ができます。
送信 

〔使い方〕
  • 「アドレス非公開」をチェックすれば、自分のメールアドレスを公開しないで他の方からメールを受け取れます。
  • 問題が解決した際には、解決ボタンをチェックして解決した旨のコメントをつけてください。これは、初めにトピックを作った人と管理人のみが可能です。
  • 半角カタカナ、機種依存文字(全角ローマ数字、○の中の数字等)は文字化けの原因となりますので使わないでください。