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アイソタイプコントロール抗体の特異性 トピック削除
No.6335-TOPIC - 2017/09/25 (月) 12:42:02 - あいこ
FACSの抗体染色のネガティブコントロールとして、特定の抗原とは反応しないIgGなどのコントロール抗体が用いられることがあるかと思います。この抗体はどういった方法でコントロール抗体として作成されているのでしょうか?

つまりこのアイソタイプコントロールとして販売されているIgGが特定の抗原と反応しないとういのは、
Fab部分が何かしらの方法で認識できないようになっているのか?
抗体全体としては特定の抗原は認識しないが、様々なものを認識できるIgGが混ざったもの?なのか
または他の何らかの方法で反応しないようになっているのか?

ご存知のかたおりましたら、ご教授していだけると助かります。
 
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(無題) 削除/引用
No.6335-4 - 2017/09/29 (金) 09:53:24 - moz
CDRをpoly-Gly等に改変した組換えアイソタイプコントロール抗体って需要があるのだろうか?

(無題) 削除/引用
No.6335-3 - 2017/09/25 (月) 21:07:57 - あいこ
なるほど。経験則的に特異的な結合はしないと思われるものを使用するようになっているのですね。

(無題) 削除/引用
No.6335-2 - 2017/09/25 (月) 20:52:01 - T
mouse IgG1,k isotype controlとして広く使われているMOPC-21はマウスミエローマ細胞が産生する抗体で、特異性はわかっていません。抗原選択を受けていないナイーブレパートリーの中の一つのB細胞ががたまたまミエローマ化により抗体が大量に取れ、実験的にもなにも染めない(正確には「バックグラウンド染色が他の抗体と比べて最低レベルを示す」)のでisotype controlとして使っているということだと思います。他のisotype controlも、結果的に何も染めないというunkown specificityの抗体です。実は何かに反応するという可能性も無きにしも非ずですが、まあ大丈夫でしょうという感じです。
むしろ「バックグラウンド染色が他の抗体と比べて最低レベル」という選び方から来る問題があります。実はモノクロナール抗体の非特異性結合のレベルは同じisotypeでも各クローンによって違いがありますので、市販isotype controlを基にpositive, negativeを機械的に引くとnegativeの山が範囲から飛び出てしまうことがままあります。intracellular stainingなどは特に非特異的結合の差は顕著ですね。反対に、ごくまれにisotype controlより非特異的結合が低い抗体もあり、オーバープロットを出すと少し滑稽に見えます。そのため、isotype controlも絶対視はせず、気休め的なものとみなしたほうがいいと思います。

アイソタイプコントロール抗体の特異性 削除/引用
No.6335-1 - 2017/09/25 (月) 12:42:02 - あいこ
FACSの抗体染色のネガティブコントロールとして、特定の抗原とは反応しないIgGなどのコントロール抗体が用いられることがあるかと思います。この抗体はどういった方法でコントロール抗体として作成されているのでしょうか?

つまりこのアイソタイプコントロールとして販売されているIgGが特定の抗原と反応しないとういのは、
Fab部分が何かしらの方法で認識できないようになっているのか?
抗体全体としては特定の抗原は認識しないが、様々なものを認識できるIgGが混ざったもの?なのか
または他の何らかの方法で反応しないようになっているのか?

ご存知のかたおりましたら、ご教授していだけると助かります。

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