Bio Technical フォーラム

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CD31の染色について トピック削除
No.636-TOPIC - 2012/06/15 (金) 09:13:59 - 初心者
いつも参考にさせていただいています。

CD31の蛍光染色を検討中ですが、染まらず困っています。

ホルマリン固定のマウス組織で、パラフィン切片です。
染色操作は以下の通りです。

脱パラ

熱処理賦活化 95℃10分後、冷却1時間

ブロッキング 2次抗体動物血清+スキムミルク

1次抗体 4℃オーバーナイト

PBS WASH

2次抗体

PBS WASH

DAPI

PBS WASH

脱水、封入

他の染色でも同じ操作で行っていますが、問題なく染まっています。

CD31の染色で注意すべき点などありましたら、ご教授ください。
 
 
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(無題) 削除/引用
No.636-5 - 2012/06/18 (月) 07:18:28 - どん兵衛
マウスの筋肉しか染めたことはありませんが、BDの抗体(MEC 13.3)ならホルマリン固定でも染色可能です。やはり、凍結切片ですが。

目的が分からないのでなんともいえませんが、CD31がだめならFactor VIIIとか他のマーカーを染めればいいんじゃない?

固定の仕方がポイントです 削除/引用
No.636-4 - 2012/06/15 (金) 12:54:33 - mei
ホルマリン固定しているとCD31はマウスでもヒトのサンプルでも綺麗に染まりませんよ。
マウスに移植した脳腫瘍異種移植を染める時はクライオスタットを使ってます、つまり凍結保存でないと染まりません。

(無題) 削除/引用
No.636-3 - 2012/06/15 (金) 11:25:39 - Q
一次抗体の検討

(無題) 削除/引用
No.636-2 - 2012/06/15 (金) 11:19:10 - ~
抗体メーカーの推奨する条件・ポジコン、抗体の希釈倍率
蛍光物質の特性
検出装置の(フィルター)特性

CD31の染色について 削除/引用
No.636-1 - 2012/06/15 (金) 09:13:59 - 初心者
いつも参考にさせていただいています。

CD31の蛍光染色を検討中ですが、染まらず困っています。

ホルマリン固定のマウス組織で、パラフィン切片です。
染色操作は以下の通りです。

脱パラ

熱処理賦活化 95℃10分後、冷却1時間

ブロッキング 2次抗体動物血清+スキムミルク

1次抗体 4℃オーバーナイト

PBS WASH

2次抗体

PBS WASH

DAPI

PBS WASH

脱水、封入

他の染色でも同じ操作で行っていますが、問題なく染まっています。

CD31の染色で注意すべき点などありましたら、ご教授ください。
 

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