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血清・血漿からのmicroRNA分離について トピック削除
No.641-TOPIC - 2012/06/17 (日) 19:58:18 - ほたるとかりん
血清・血漿からのmicroRNA分離に関して二つ質問させてください。

@血清由来のほうが血漿よりもmicroRNA収量が多いというお話を聞いて、同じ個体由来の血液をそれぞれ血清・血漿で保存してみて抽出後real-time PCRで測定してみました。
吸光高度計でのtotalRNAとしての収量は同程度だったのですが、血漿由来のサンプルでは一切microRNAが増幅されませんでした。
このような現象を経験された方はいらっしゃいますでしょうか?
ちなみに血漿はへパリン処理したもの、抽出キットはキアゲンのmiScript mini kitを用いています。

A個体によって同じ量の血清を用いてもtotalRNAとしての収量(吸光高度計)が全然ちがいます。中には測れない個体も沢山あります。
このような現象も個体差として普通のことなのでしょうか?
保存方法や取扱についてなにかアドバイスあれば、よろしくお願いします。
 
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(無題) 削除/引用
No.641-2 - 2012/06/19 (火) 23:55:49 - mi1
最近やってなくて、あまり自信が無いですが...

@ヘパリンでなくEDTAを使った方が良いということだったと思う。
血清の方が凝固に行かない分、RNA量が多いかもしれないが、邪魔な物質も非常に多い。

Aどの程度個体差があるかは知らないが、あなたの場合は個体差よりも実験の仕方がまずいような印象を受ける(あくまで印象です)。


自分で解決するのが困難ということなら、和光のmicroRNA Extractor SP Kitなど、専用のキットを使うのも良いと思います。
東レのアレイに付属するやつもあったと思いますが、あれは単独では提供しないらしいです。

血清・血漿からのmicroRNA分離について 削除/引用
No.641-1 - 2012/06/17 (日) 19:58:18 - ほたるとかりん
血清・血漿からのmicroRNA分離に関して二つ質問させてください。

@血清由来のほうが血漿よりもmicroRNA収量が多いというお話を聞いて、同じ個体由来の血液をそれぞれ血清・血漿で保存してみて抽出後real-time PCRで測定してみました。
吸光高度計でのtotalRNAとしての収量は同程度だったのですが、血漿由来のサンプルでは一切microRNAが増幅されませんでした。
このような現象を経験された方はいらっしゃいますでしょうか?
ちなみに血漿はへパリン処理したもの、抽出キットはキアゲンのmiScript mini kitを用いています。

A個体によって同じ量の血清を用いてもtotalRNAとしての収量(吸光高度計)が全然ちがいます。中には測れない個体も沢山あります。
このような現象も個体差として普通のことなのでしょうか?
保存方法や取扱についてなにかアドバイスあれば、よろしくお願いします。

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