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miRNAがworkしているかどうかの確認 トピック削除
No.6412-TOPIC - 2017/10/25 (水) 01:58:35 - ねずみん
miRNAを過剰発現させるなり、miRNA mimicを使うなりした場合、導入したmiRNAが標的のmRNAを抑制しているかどうかをmRNAのRT-PCRでは必ずしも評価できないと考えてよろしいでしょうか?

siRNAは標的mRNAにbindした後、mRNAが分解されるのでRT-PCRでも標的mRNAの発現量が下がっていることは確認できますよね。
一方、miRNAの場合は必ずしもmRNAを分解しないので、RT-PCRをしてみてもmRNAの発現量が下がっていないことが多いでしょうか?
ご経験があれば教えていただければ幸いです。
 
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(無題) 削除/引用
No.6412-3 - 2017/10/25 (水) 16:35:03 - ねずみん
おお様

いつもありがとうございます。
luciferaseプラスミドにmirの標的配列をつけて、リポフェクションして評価してみたいと思います。

(無題) 削除/引用
No.6412-2 - 2017/10/25 (水) 04:18:32 - おお
>必ずしも評価できないと考えてよろしいでしょうか?

Yes。それ以上、以下でもないです。

miRNAがworkしているかどうかの確認 削除/引用
No.6412-1 - 2017/10/25 (水) 01:58:35 - ねずみん
miRNAを過剰発現させるなり、miRNA mimicを使うなりした場合、導入したmiRNAが標的のmRNAを抑制しているかどうかをmRNAのRT-PCRでは必ずしも評価できないと考えてよろしいでしょうか?

siRNAは標的mRNAにbindした後、mRNAが分解されるのでRT-PCRでも標的mRNAの発現量が下がっていることは確認できますよね。
一方、miRNAの場合は必ずしもmRNAを分解しないので、RT-PCRをしてみてもmRNAの発現量が下がっていないことが多いでしょうか?
ご経験があれば教えていただければ幸いです。

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