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(無題) 削除/引用 No.6422-4 - 2017/10/27 (金) 13:59:12 - AP 本来、クロロフォルムを加えて相分離させて、水層のみとってIPAを加えるわけですよね。 IPAを加えた後、クロロフォルムを加えて相分離させても（相分離はするんでしょうかね。比率によっては相分離しないポイントもありそうですが）、通常の場合と分配率が違ってくるわけで。IPAはクロロフォルム層にかなり入るはずですし、IPA含有水層にクロロフォルムがかなり入ってくると思います。 下手にあとからクロロフォルムを加えたりなんかせずに、Trizol体積の半分くらいまでIPAを足して、アルコール沈殿してしまった方がよかったんじゃないでしょうか。そして、沈殿物をスターティングマテリアルとして再度Trizolを加えて通常の精製を行う。私がそういうはめになったとしたら、そうします。 すでにクロロフォルムを加えてしまったのなら、IPA含有水層に適当量のIPAを足してアルコール沈殿、からの再精製。

(無題) 削除/引用 No.6422-3 - 2017/10/27 (金) 12:05:34 - TZ アドバイスありがとうございます。その後結局、上層の容量が普段とほとんど変わらなかったことから、「アルコールは多分有機層に吸収されただろ」と適当な判断で普段通りに進めてしまったのですが、おおさんの推測的には結構微妙そうな感じかもしれませんね。 大して重要でもないサンプルで、今時間がなくてエタノールで止めてしまっているんですが、懸濁後どんな具合かしっかり様子を見てみようと思います。 結論としては、やり直すのが無難、という感じかもしれませんね。

(無題) 削除/引用 No.6422-2 - 2017/10/27 (金) 11:52:59 - おお 経験はないです。多分RNAは中間層の蛋白の沈殿があるところに存在するのではと想像します。 中間層をとってきて、、、どうするかななぁ、、、そこそこおおめのTrizolを加えて精製し直すかな。。。でもうまく一回溶かさないとむりかも。 とすると中間層をSDSとかウレア溶液みたいなので溶かしてからTrizolをくわえてせいせいかな。。。 まあ望み薄ですし、取れても違うときに精製したサンプルと比べれるかというのも、、、

TRIzol処理で、クロロホルム→イソプロのミス 削除/引用 No.6422-1 - 2017/10/27 (金) 10:58:34 - TZ TRIzol処理の最初のステップで、1/5のクロロホルムを加えるところで誤ってイソプロを入れてしまい、入れ終わった瞬間に間違えたと気付いてクロロホルムを入れなおしたのですが、RNAはどうなるでしょう…？ せっかくなので現在そのまま続けている所ですが、経験談等ございましたらご教示いただけると幸いに思います。

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