Bio Technical フォーラム

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メラニン産生細胞からのメラニン抽出 トピック削除
No.6452-TOPIC - 2017/11/13 (月) 18:52:23 - Y
私はメラニン産生細胞に化合物を添加し、メラニン産生抑制効果を検討しています。

細胞を溶解しメラニンを抽出する行程があるのですが、10% DMSO-1 M NaOHを細胞に添加し、そのまま60℃で1時間加熱したあとに、溶解液を遠心処理すると黒いペレットが確認できメラニンの抽出が十分にできておりません。
加熱時間を延ばしてみたり、加熱前にソニケーションしてみたりしたのですが、十分に抽出することができず頭を悩ませております。また、溶解液の量を増やすと十分な吸光度が得られず、サンプルの評価が難しくなってしまいます。

非常に初歩的な質問で申し訳ありませんがどうかみなさまのお力添えをよろしくお願いいたします。
 
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(無題) 削除/引用
No.6452-4 - 2017/11/16 (木) 11:21:44 - Y
toto様

非常に有益な情報をありがとうございます。
イメージングによる評価法を検討してみたいと思います。

ema様

情報提供ありがとうございます。
しかし二光子励起顕微鏡を使用するとなると少々難しいかもしれません。。。

画像からの 削除/引用
No.6452-3 - 2017/11/15 (水) 11:28:18 - ema
https://www.dermatol.or.jp/uploads/uploads/files/news/J20160620_1.pdf
こんな方法がありました。

(無題) 削除/引用
No.6452-2 - 2017/11/14 (火) 09:36:17 - toto
大部分を溶液として抽出するのはかなり難しいと思います。メラニンとはいっても、実際にはラジカルで架橋された複雑な成分なので、抽出されるものもありますが、されないものもかなり残ります。抽出して定量するよりも、目的のためには、むしろ、細胞全体のイメージングで効果を判定された方がより正確で、より容易な気がします。

メラニン産生細胞からのメラニン抽出 削除/引用
No.6452-1 - 2017/11/13 (月) 18:52:23 - Y
私はメラニン産生細胞に化合物を添加し、メラニン産生抑制効果を検討しています。

細胞を溶解しメラニンを抽出する行程があるのですが、10% DMSO-1 M NaOHを細胞に添加し、そのまま60℃で1時間加熱したあとに、溶解液を遠心処理すると黒いペレットが確認できメラニンの抽出が十分にできておりません。
加熱時間を延ばしてみたり、加熱前にソニケーションしてみたりしたのですが、十分に抽出することができず頭を悩ませております。また、溶解液の量を増やすと十分な吸光度が得られず、サンプルの評価が難しくなってしまいます。

非常に初歩的な質問で申し訳ありませんがどうかみなさまのお力添えをよろしくお願いいたします。

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