BioTechnicalフォーラム [NK細胞傷害活性が低ET比で上がる理由]

NK細胞傷害活性が低ET比で上がる理由

No.6482-TOPIC - 2017/11/24 (金) 22:13:17 - pf

カルセインアッセイを用いて、がん細胞に対するNK細胞の傷害活性を測定しております。
使用細胞は、ターゲットが胃癌細胞株Ｎ８７、エフェクターはＮＫ細胞株ＮＫ９２です。
共培養時間は４時間、Ｅ／Ｔ比は５０：１、２５：１,、１２．５：１、６：１、３：１と測定しています。

これらの２細胞のみを共培養した場合には、このアッセイできれいに測定できることは確認済です。
現在、さらに刺激物質(がん由来の分泌物)を添加し、同様に測定していますが、その結果の解釈に悩んでいます。

通常、Ｅ／Ｔ比高→低にしたがって活性は徐々に下がる右下がりのグラフになると思うのですが、刺激物質を加えると、高ＥＴ比ではきれいに出るのに低ＥＴ比になるとが逆転して上がってしまいます。
具体的には、５０：１～１２．５：１まで徐々に下がりきれいな結果が出るのですが、６：１，３：１では上がり、グラフにするとV字型のようになってしまいます。

この理由がわからず悩んでいます。
同様の経験をされた方、原理について詳しい方いらっしゃいましたら、ご教授いただけますと幸いです。
よろしくお願いいたします。
　

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No.6482-4 - 2017/11/28 (火) 19:17:43 - pf

mon様、X様

ありがとうございます。
説明不足でしたが、刺激物は事前にNK細胞側にのみ添加しております。
培養時間を考えると、がん細胞側への影響は小さいと一応考えています。
ただ確証はないので、刺激物とがん細胞のみの培養で同様に変化するかどうかは一度試してみようと思います。

X様
アッセイに関してですが、前者の方です。細胞外に排出されたカルセインの蛍光強度を測定しています。
共同研究している企業のプロトコールに沿ったものですが、今まで特に問題なく測定できています。

(無題)

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No.6482-3 - 2017/11/27 (月) 11:49:59 - X

同様の経験があるわけでも、原理に詳しいわけでもないので、少し気が引けるのですが、ちょっと引っかかるので、何点か。

このアッセイは、がん細胞株をカルセインでラベルしておいて、NK細胞を加えた時に起こる細胞障害により、細胞外にリリースされたカルセインの蛍光を検出するのでしょうか？　（Cr51リリースと同じ原理になりますが、低分子蛍光物質を放射性同位元素と同じように扱えるとは考えにくいようにも思います。）

あるいは、カルセインでラベルされたがん細胞を、NK細胞と共培養したのち、EthD-1で障害細胞を染色し、カルセイン陽性がん細胞のうち、EthD-1陽性細胞の比率をみる（NK細胞はカルセイン陰性で除外する）ことにより、障害活性を判定するのでしょうか？

いずれにせよ、E/T比を下げた時に細胞障害が上がるという理解になり、その刺激に用いた分泌物の細胞毒性をはっきりさせる事が先決と考えます。例えば、NK細胞なしで、ラベルしたがん細胞だけを分泌物で刺激した場合の細胞障害はどうでしょうか？　３：１で上がるという事は、０：１にした場合にはさらに上昇する（すなわち、分泌物自体が細胞障害性を示す）こともあり得ますよね。この場合、大量（５０：１ではがん細胞の５０倍量）のNK細胞が存在することにより、何らかのメカニズムで分泌物の毒性が希釈あるいは中和されれば、おっしゃられているような現象が見られるかもしれませんね。

(無題)

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No.6482-2 - 2017/11/25 (土) 06:57:09 - mon

刺激物質によって、がん細胞が増殖、もしくはがん細胞のエステラーゼ活性が上昇したとか。

NK細胞傷害活性が低ET比で上がる理由

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No.6482-1 - 2017/11/24 (金) 22:13:17 - pf

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