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DMSOで溶かした試薬処理について トピック削除
No.6603-TOPIC - 2018/01/20 (土) 15:44:24 - しいたけ帝国
現在、Antimycin Aという試薬を細胞に処理しているのですが、その試薬を培地に入れると培地内で試薬らしきものが固まってしまいます。試薬を処理しても細胞に影響がないのでおそらくその固形物は試薬だと思われます。

この原因について究明したいです。

1.試薬はジメチルスルホキシド(DMSO)に溶かしている。
2.試薬は処理前は-30℃保存してあり、処理際には氷上に出し、
  使うときに室温で溶かしてから使う。(この試薬は氷上では溶けません。)
3.以前は試薬が効いていた。試薬の凍結融解の繰り返しが原因だと考え、
  試薬を変えたが培地内で固まってしまった。
4.顕微鏡で試薬の塊を観察すると、黒く映る。


アンチマイシンを細胞に処理したことのある方、またはこの解決策にご教授いただける方の返信お待ちしております。
 
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(無題) 削除/引用
No.6603-5 - 2018/01/24 (水) 19:34:43 - 終濃度100%
先日、アンチマイシン処理の際にDMSOの濃度を10%に調製したのちに培地に添加したところ、試薬が凝固することはありませんでした。
しかし、試薬がうまく効いていないように思えますが、、、

問題点は改善されました!
ありがとうございました!!

(無題) 削除/引用
No.6603-4 - 2018/01/23 (火) 14:26:15 - mon
> 急な濃度低下によるDMSOの凝固があることを知らなかったので試してみます。
ではなく、急なDMSO濃度低下によるアンチマイシンの析出です。

(無題) 削除/引用
No.6603-3 - 2018/01/22 (月) 21:06:51 - しいたけ帝国
返信ありがとうございます!

500の培地にDMSOで溶かしたアンチマイシン(100mM)を0.5添加しています。
急な濃度低下によるDMSOの凝固があることを知らなかったので試してみます。

為になる意見ありがとうございました。

(無題) 削除/引用
No.6603-2 - 2018/01/21 (日) 08:29:31 - mon
アンチマイシンの使用経験はありませんので、参考までに。
試薬が凝固するのは、いきなりDMSO濃度が低下するためかもしれません。
まずは、10~50% DMSOになるように培地で希釈してから、次いで目的濃度になるように培地に添加してみてはいかがでしょうか。
また、実験目的によりますが0.5%DMSO程度だと細胞(増殖)に影響はほとんど出ませんので、最終DMSO濃度が0.5%になるように試薬ストックをDMSOで希釈することも解決に繋がるかもしれません。
FBS(アルブミン濃度)濃度も影響する可能性があります

DMSOで溶かした試薬処理について 削除/引用
No.6603-1 - 2018/01/20 (土) 15:44:24 - しいたけ帝国
現在、Antimycin Aという試薬を細胞に処理しているのですが、その試薬を培地に入れると培地内で試薬らしきものが固まってしまいます。試薬を処理しても細胞に影響がないのでおそらくその固形物は試薬だと思われます。

この原因について究明したいです。

1.試薬はジメチルスルホキシド(DMSO)に溶かしている。
2.試薬は処理前は-30℃保存してあり、処理際には氷上に出し、
  使うときに室温で溶かしてから使う。(この試薬は氷上では溶けません。)
3.以前は試薬が効いていた。試薬の凍結融解の繰り返しが原因だと考え、
  試薬を変えたが培地内で固まってしまった。
4.顕微鏡で試薬の塊を観察すると、黒く映る。


アンチマイシンを細胞に処理したことのある方、またはこの解決策にご教授いただける方の返信お待ちしております。

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