Bio Technical フォーラム

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PCR トピック削除
No.6626-TOPIC - 2018/01/27 (土) 01:25:57 - ppp
ゲノム抽出をしてPCRをしています。

グラム陰性の菌体はうまく増幅したのですがグラム陽性の Bacillus属が上手く増幅してくれません。

条件を色々試しているのですがぜんぜん上手くいかないので助けてください。
 
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(無題) 削除/引用
No.6626-5 - 2018/01/27 (土) 11:10:33 - み
増幅しない原因として色々考えられそうですが、
DNAは質的に問題なく取得できたのか?またそれをどのように確かめたのか。

仮にDNAが取得できていると仮定してグラム陰性菌と同じ遺伝子を増幅しているわけではないですよね。種が異なればプライマー配列も異なるでしょうし、増幅されないプライマー配列はworkすることが確認されているものなのか?

グラム陽性細菌の方では複数の遺伝子増幅が不可能なのか?

要はDNAの質・量の問題なのか、PCR反応(特にプライマー配列)の問題なのかが知りたい。
反応を阻害する物質が混入していると仮定して、精製過程を何か加えたのか?
templateの希釈系列を作ってもいずれも増幅しないのか?

このあたり色々試したと仰っているのだから回答してください。

(無題) 削除/引用
No.6626-4 - 2018/01/27 (土) 10:50:23 - AP
まあ、質問の仕方も悪いけどな。
まじめに質問するなら、いろいろ試したというけど、どういう手法で何をやってどういう結果だったのか(うまくいかないとかうまく増幅しないというのは感想、自分の判断であって、結果を記載するものではない)きちんとdescribeしなきゃ。レポートだって論文だってそうだろ。科学者の端くれなんだから。

で、DNAはどうやって抽出しているのだろうか。ペプチドグリカンあたりが阻害しているんじゃないかと思われるが、

(無題) 削除/引用
No.6626-3 - 2018/01/27 (土) 09:44:09 - ppp
ここは博士や研究員、教授レベルの相談しかできないのでしょうか?
YKさんのような頭の良い?人にとってクソ低レベルな相談をしてはいけないのでしょうか?

このサイトにわざわざレス欲しいために自問自答できる質問を考えるとかする人いないでしょ笑

そういう人もいるとは思いますが、くだらない事を話してる掲示板に限定されると思います。

(無題) 削除/引用
No.6626-2 - 2018/01/27 (土) 02:44:08 - YK
もうそういう釣りのような質問やめませんか。

PCR 削除/引用
No.6626-1 - 2018/01/27 (土) 01:25:57 - ppp
ゲノム抽出をしてPCRをしています。

グラム陰性の菌体はうまく増幅したのですがグラム陽性の Bacillus属が上手く増幅してくれません。

条件を色々試しているのですがぜんぜん上手くいかないので助けてください。

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