Bio Technical フォーラム

  • バイオ関連の実験をする上での、試薬、機器、プロトコールなどの情報交換の場です。
  • 新しいテーマで話を始める場合、質問をする場合は「新しいトピックを作る」から書き込みをしてください。
  • 質問に対して解答できる方は是非、書き込んで下さい。
  • このフォーラムにふさわしくないと管理人が判断した投稿は予告なく削除します。

新しいトピックを作る | トピック一覧 | 研究留学ネットに戻る

ひとつ前のフォーラム(readのみ)

このスレッドをはてなブックマークに追加このスレッドをはてなブックマークに追加

マウス卵巣組織の凍結切片について トピック削除
No.6628-TOPIC - 2018/01/28 (日) 09:54:33 - ゆき
マウス卵巣組織をHE染色したいのですが、うちのラボにはクライオスタットがあり、ミクロトームがありません。
そのため、凍結切片を作って染色しようと思うのですが、論文ではパラフィン切片の手法ばかり使われています。
凍結切片からHE染色するのは難しいのでしょうか?
試しに卵巣組織を4% PFA固定した後に凍結切片を作ってみたのですが、卵巣組織が壊れてしまい、きれいな標本はできませんでした。
私が凍結切片に慣れてないので技術的なトラブルの可能性は大いにあるのですが、技術的に凍結切片からHE染色は可能でしょうか??
 
- このトピックにメッセージを投稿する -



10件 ( 1 〜 10 )  前 | 次  1/ 1. /1


(無題) 削除/引用
No.6628-10 - 2018/01/29 (月) 14:09:02 - AP
昔は普通のパラフィン用ミクロトームを冷凍庫に入れたり冷凍室内で作業したりして凍結切片を作っていたものさ、、、、、、、
逆も可だろうが、共用のクライオスタットなら他の人が嫌がるかもね。

(無題) 削除/引用
No.6628-9 - 2018/01/29 (月) 13:56:44 - 1q2w3え4t6y789
凍結切片のHE染色、ふつうにやってます。脾臓とか筋系とか比較的硬い組織ならばパラフィン切片と区別付かないくらいきれいにできます。しかし脳とか肝臓とかの柔らかい組織の凍結切片は普通の方法ではきれいな標本を得るのはなかなか難しい(すだれ状に一方向に切片が割れたり崩れたりする)です。残念ですが技術の向段階的なシュークロース置換処理とかしてそれから切るとかなり改善されるとは聞きます。

パラフィン切片は設備ないなら専門業者に有料で委託もできますよ。プロが角度とか部位とかの要望を聞いて作ってくれます。最近はそうする人の方が多いのではないでしょうか。

(無題) 削除/引用
No.6628-8 - 2018/01/29 (月) 09:16:09 - ゆき
いろいろとご意見ありがとうございます。
もちろん、凍結で切片が破壊されている可能性も考えられると思います。
やはりパラフィンの方が形態を維持しやすいですよね。

おお様がおっしゃってる、クライオスタットでパラフィン切片を作ってる人はおられるのでしょうか?
それができるのならうちでもパラフィン切片を作れそうです 笑

(無題) 削除/引用
No.6628-7 - 2018/01/28 (日) 18:07:16 - おお
ちょっとお馬鹿な質問かもしれませんが、クライオスタットでパラフィン切片切れない?

(無題) 削除/引用
No.6628-6 - 2018/01/28 (日) 18:05:16 - おお
>形態はパラフィン切片の方が保持されやすい
確かに一般的にはそうでしょうね。

(無題) 削除/引用
No.6628-5 - 2018/01/28 (日) 18:03:21 - おお
検体が貴重なものであり、多角的な手法に対応できるように固定せず凍結して保存するということはあると思います。そういう組織はあるときはHEなど染色に使い、電顕にも使ったり、スライスしてWB、DNAシーケンス、RNAもとるかな、、まあ幅広い対応ができますので。

凍結で組織が壊れないように急速に凍結するよう工夫がいくらかあるようですが、凍結で組織が壊れている可能性はないですか?

(無題) 削除/引用
No.6628-4 - 2018/01/28 (日) 17:06:06 - のま
HEは基本的には形態を見るものです。そしてその形態はパラフィン切片の方が保持されやすいと思います。

凍結を使わない理由はそこだと思いますが、やらないことはないですね。ただどうしてパラフィンでやらないの?という質問は来るとは思います。

(無題) 削除/引用
No.6628-3 - 2018/01/28 (日) 16:53:09 - ゆき
APさん、ありがとうございます。

論文を見てるとパラフィン切片の写真しか見たことがなかったので、凍結よりもパラフィンの方が染色がきれいなのかなと思ってしまいました。
このあたりは知識が少ないため、すみません。
凍結でもHE染色はできるのですね、安心しました。

(無題) 削除/引用
No.6628-2 - 2018/01/28 (日) 11:21:14 - AP
もちろん凍結切片だってHE染色できますよ。
できないかもって思う理由は何かな?

マウス卵巣組織の凍結切片について 削除/引用
No.6628-1 - 2018/01/28 (日) 09:54:33 - ゆき
マウス卵巣組織をHE染色したいのですが、うちのラボにはクライオスタットがあり、ミクロトームがありません。
そのため、凍結切片を作って染色しようと思うのですが、論文ではパラフィン切片の手法ばかり使われています。
凍結切片からHE染色するのは難しいのでしょうか?
試しに卵巣組織を4% PFA固定した後に凍結切片を作ってみたのですが、卵巣組織が壊れてしまい、きれいな標本はできませんでした。
私が凍結切片に慣れてないので技術的なトラブルの可能性は大いにあるのですが、技術的に凍結切片からHE染色は可能でしょうか??

10件 ( 1 〜 10 )  前 | 次  1/ 1. /1


パスワードを入力してチェックした記事を チェックした記事を

このトピックにメッセージを投稿する
名前 
メール   アドレス非公開
   タイトル 
本文      
設定  クッキーを保存(次回の入力の手間を省けます)
上に上げない(トピックの一覧で一番上に移動させません)
解決(問題が解決した際にチェックしてください)
暗証  半角英数字8-12文字の暗証番号を入れると、あとで削除、修正ができます。
送信 

〔使い方〕
  • 「アドレス非公開」をチェックすれば、自分のメールアドレスを公開しないで他の方からメールを受け取れます。
  • 問題が解決した際には、解決ボタンをチェックして解決した旨のコメントをつけてください。これは、初めにトピックを作った人と管理人のみが可能です。
  • 半角カタカナ、機種依存文字(全角ローマ数字、○の中の数字等)は文字化けの原因となりますので使わないでください。