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核以外のDAPI染色について トピック削除
No.6703-TOPIC - 2018/02/19 (月) 08:48:33 - こん
久しぶりに細胞染色を始めましたが、DAPIで染めると核以外に細胞質?に小さなドットが5-10個ほど見えることに気づきました。かなりがっつり染まっています。

ミトコンドリアDNAが染まっているんでしょうか?それともマイコプラズマが感染していて、それを染めているという可能性もありますか?あるいは、細胞毎で核だけが染まるもの、それ以外にも染まるものというのがあるのでしょうか?
 
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No.6703-6 - 2018/03/02 (金) 19:40:10 - tfa
正常な細胞をに近めな株で無理な継代すると見えたことが何度かあります

(無題) 削除/引用
No.6703-5 - 2018/02/21 (水) 16:17:01 - こん
みなさまありがとうございます。

micronucleiというものがあるのですね。調べてみたところ、このような構造物でした!
openi.nlm.nih.gov/detailedresult.php?img=PMC3211446_1556-276X-6-356-6&req=4

ストレスといいますか、確かにPEIでtransfectionし終えた細胞を48時間後に染めていますので、それがストレスになっているのかもですね。

実は今、PCRでマイコの感染チェックをしているところで、結果がで次第みなさまにお伝えしようと思っていました。まだ結果は出ていません。後ほど蛍光染色画像を投稿させていただきます。取り急ぎお礼まで。

(無題) 削除/引用
No.6703-4 - 2018/02/21 (水) 15:50:33 - MTP
何かストレスをかけているならmicronucleiの可能性もありますね。

(無題) 削除/引用
No.6703-3 - 2018/02/19 (月) 20:43:15 - たぶん
私もマイコプラズマだと思います。

マイコプラズマ検出キットが売っています。

もしくは

混合プライマーを用いたPCRで判断する方法もあります。
(文献が今は手元にありませんがご希望でしたら調べて翌日以降返信します)

(無題) 削除/引用
No.6703-2 - 2018/02/19 (月) 09:33:40 - AA
マイコプラズマの感染を疑ったときにDAPIで判別できると指導されたことがあります。
写真を見ないとわかりませんが、おそらくマイコプラズマだと思います。

核以外のDAPI染色について 削除/引用
No.6703-1 - 2018/02/19 (月) 08:48:33 - こん
久しぶりに細胞染色を始めましたが、DAPIで染めると核以外に細胞質?に小さなドットが5-10個ほど見えることに気づきました。かなりがっつり染まっています。

ミトコンドリアDNAが染まっているんでしょうか?それともマイコプラズマが感染していて、それを染めているという可能性もありますか?あるいは、細胞毎で核だけが染まるもの、それ以外にも染まるものというのがあるのでしょうか?

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