Bio Technical フォーラム

  • バイオ関連の実験をする上での、試薬、機器、プロトコールなどの情報交換の場です。
  • 新しいテーマで話を始める場合、質問をする場合は「新しいトピックを作る」から書き込みをしてください。
  • 質問に対して解答できる方は是非、書き込んで下さい。
  • このフォーラムにふさわしくないと管理人が判断した投稿は予告なく削除します。

新しいトピックを作る | トピック一覧 | 研究留学ネットに戻る

ひとつ前のフォーラム(readのみ)

このスレッドをはてなブックマークに追加このスレッドをはてなブックマークに追加

水に溶けない阻害剤 トピック削除
No.6713-TOPIC - 2018/02/21 (水) 15:52:48 - 1610
アフリカツメガエルの卵母細胞に阻害剤(U0126)を効かせるためDMSO溶媒のものをバッファーに少し添加したのですが白く析出しました。先生にこの阻害剤はほとんど水に溶けないがそれでも効くといわれたのですが、効かせるタイミングが先生が従来やっていたタイミングと違うためか(アクチベーション後で多くのチャネルが閉じている時期)よく効きません。そこで質問なのですが、そもそもこのように水にほとんど溶けない阻害剤はどのような機構で効いているのでしょうか?
例えば
・ごく僅かに水に溶けているものが細胞内に入り効いている
・溶けてはいないが微粒子状になったものが細胞内に入り効いている
・DMSOによって何かうまく膜を浸透するようになる
などの中でどのようなメカニズムで働いているのかおわかりの方がいたら教えてください。
また、このような水に溶けない阻害剤はどのようにしたらうまくきかす事ができるのでしょうか?
僅かに水に溶けているものだと仮定して、水に溶かしたものを遠心して上清をマイクロインジェクションしてみたりしたのですがうまく効きませんでした。
 
- このトピックにメッセージを投稿する -



6件 ( 1 〜 6 )  前 | 次  1/ 1. /1


(無題) 削除/引用
No.6713-6 - 2018/02/22 (木) 08:06:23 - おお
>maximum solubility in plain water is estimated to be about 10-50 µM

-> maximum solubility in plain water is estimated to be about 10-50 μM

(無題) 削除/引用
No.6713-5 - 2018/02/22 (木) 07:59:16 - おお

Selective non-competitive inhibitor of MAP kinase kinase (MKK). Inhibits MKK1, MKK2 (IC50 values of 0.07 and 0.06 μM, respectively)
http://www.abcam.com/u0126-ab120241.html

Solubility: Soluble in DMSO at 200 mg/mL; very poorly soluble in ethanol; very poorly soluble in water; maximum solubility in plain water is estimated to be about 10-50 µM
https://www.lclabs.com/products/177-u-6770-u0126

IC50からみると効果が期待できるだけの濃度は水にとけるんじゃないの

(無題) 削除/引用
No.6713-4 - 2018/02/22 (木) 07:45:39 - おお
Membrane-permeable inhibitors of PKA (KT5720, 1 μM; cAMPS-Rp, 10 μM) and ERK (U0126, 1 μM) activation...

https://link.springer.com/article/10.1186%2F1744-8069-4-26

膜透過性がないインヒビターは細胞にかけて使ったりしないのが一般的です。

(無題) 削除/引用
No.6713-3 - 2018/02/21 (水) 21:04:22 - Tracker
ストック濃度を含め、現在の溶かす手順を書くとよいと思います。

例えばDMSOに溶解した高濃度のストックをいきなり水系の溶媒に溶かしてたりしますか?
ある程度DMSOで希釈して濃度を薄めてから、水系の溶媒に溶かすと思いますが、どうでしょうか?
この際、実験系によってはDMSOの持ち込み量が問題になるので、その辺りとの兼ね合いで希釈調製すると思います。
多少DMSOが多めになっても(〜0.5%とか?)、不溶性のモノを添加するよりは大分マシです

(無題) 削除/引用
No.6713-2 - 2018/02/21 (水) 17:42:41 - おお
疎水性のものは膜透過性があるものが多いです。

水に溶けない阻害剤 削除/引用
No.6713-1 - 2018/02/21 (水) 15:52:48 - 1610
アフリカツメガエルの卵母細胞に阻害剤(U0126)を効かせるためDMSO溶媒のものをバッファーに少し添加したのですが白く析出しました。先生にこの阻害剤はほとんど水に溶けないがそれでも効くといわれたのですが、効かせるタイミングが先生が従来やっていたタイミングと違うためか(アクチベーション後で多くのチャネルが閉じている時期)よく効きません。そこで質問なのですが、そもそもこのように水にほとんど溶けない阻害剤はどのような機構で効いているのでしょうか?
例えば
・ごく僅かに水に溶けているものが細胞内に入り効いている
・溶けてはいないが微粒子状になったものが細胞内に入り効いている
・DMSOによって何かうまく膜を浸透するようになる
などの中でどのようなメカニズムで働いているのかおわかりの方がいたら教えてください。
また、このような水に溶けない阻害剤はどのようにしたらうまくきかす事ができるのでしょうか?
僅かに水に溶けているものだと仮定して、水に溶かしたものを遠心して上清をマイクロインジェクションしてみたりしたのですがうまく効きませんでした。

6件 ( 1 〜 6 )  前 | 次  1/ 1. /1


パスワードを入力してチェックした記事を チェックした記事を

このトピックにメッセージを投稿する
名前 
メール   アドレス非公開
   タイトル 
本文      
設定  クッキーを保存(次回の入力の手間を省けます)
上に上げない(トピックの一覧で一番上に移動させません)
解決(問題が解決した際にチェックしてください)
暗証  半角英数字8-12文字の暗証番号を入れると、あとで削除、修正ができます。
送信 

〔使い方〕
  • 「アドレス非公開」をチェックすれば、自分のメールアドレスを公開しないで他の方からメールを受け取れます。
  • 問題が解決した際には、解決ボタンをチェックして解決した旨のコメントをつけてください。これは、初めにトピックを作った人と管理人のみが可能です。
  • 半角カタカナ、機種依存文字(全角ローマ数字、○の中の数字等)は文字化けの原因となりますので使わないでください。