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ラット坐骨神経の細胞の生存率を知りたい トピック削除
No.6718-TOPIC - 2018/02/22 (木) 16:23:23 - パートさん
初めまして。
ラット坐骨神経をいろいろな条件で凍結融解した際の、神経細胞の生存率を検討しています。
今現在行っている方法は、新鮮あるいは凍結処理した坐骨神経をコラゲナーゼ/ディスパーゼで消化し、dishに散布して生着した細胞数を比較して生存率を出しています。
この方法ですと、バラツキが非常に大きく、新鮮神経から採取した生着数も、右足と左足で大きく違ったりして、消化によるダメージやラットの個体差がかなり影響しているように感じています。
消化することなく、そのままの状態で見る方法はないでしょうか?
例えば死細胞だけを検出できるPIなどの利用も考えましたが、組織のままでは難しいですよね?
組織切片にしたら(凍結切片でも)細胞は死んでしまうでしょうし。
どなたか、お力添えいただけたら幸いです。
 
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(無題) 削除/引用
No.6718-2 - 2018/02/22 (木) 18:01:16 - AP
細胞にばらさないで、組織培養として生化学的な生死判定はできないだろうか。
MTTアッセイのように。いまはいろいろ選択肢も増えた。
https://www.promega.jp/products/cell-health-assays/cell-viability-and-cytotoxicity-assays/

あとはどのようにノーマライズするか? 測定のあとlysisしてタンパク量とかDNA量(DAPI強度とか)を測定してそろえるとか、

ラット坐骨神経の細胞の生存率を知りたい 削除/引用
No.6718-1 - 2018/02/22 (木) 16:23:23 - パートさん
初めまして。
ラット坐骨神経をいろいろな条件で凍結融解した際の、神経細胞の生存率を検討しています。
今現在行っている方法は、新鮮あるいは凍結処理した坐骨神経をコラゲナーゼ/ディスパーゼで消化し、dishに散布して生着した細胞数を比較して生存率を出しています。
この方法ですと、バラツキが非常に大きく、新鮮神経から採取した生着数も、右足と左足で大きく違ったりして、消化によるダメージやラットの個体差がかなり影響しているように感じています。
消化することなく、そのままの状態で見る方法はないでしょうか?
例えば死細胞だけを検出できるPIなどの利用も考えましたが、組織のままでは難しいですよね?
組織切片にしたら(凍結切片でも)細胞は死んでしまうでしょうし。
どなたか、お力添えいただけたら幸いです。

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