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(無題) 削除/引用 No.672-3 - 2012/06/29 (金) 11:52:18 - キャッツ ~様　ご回答ありがとうございます。 目的ペプチドサイズは11残基です。 ELISAの系としては競合法でして、 １、anti-mouse IgGコートプレートを用いて一次抗体を固定化し、サンプルを添加して、オーバーナイトでインキュベート ２、ビオチン化標準ペプチドを添加し、サンプルが結合しなかった部分を標識して検出します（StAv-HRPを使って、蛍光で検出します）。 anti-mouse IgGコートプレートはKitの付属品なのでブロッキングなどは自分では行っていません。 やはりサンプルを何らかの方法で精製するか抗体を変えるかしかないですよね。

(無題) 削除/引用 No.672-2 - 2012/06/28 (木) 16:58:20 - ~ 目的のペプチドのサイズはどのくらいで、何（抗体、系）を使って検出しようとしているのでしょうか？ �@UFで目的外のサイズのものを除く �AコントロールIgGビーズ等に非特異に結合するものを除く �Bブロッキングが不十分で、IgGとプレートが直接結合している？→ブロッキング条件を変える �C抗体の特異性が低い？→抗体を変える

ELISAのバックグラウンド低減について 削除/引用 No.672-1 - 2012/06/28 (木) 16:27:25 - キャッツ お世話になります。 現在無細胞系（小麦胚）で発現させたペプチドをELISAで定量しようとしているのですが、小麦胚ライセートを添加しただけで大きくシグナルが出てしまい、困っています。ライセートを50倍程度希釈してみましたがあまり効果はありませんでした。 個人的にはC-18カラムでペプチドを精製するか、Phoenix Pharmaceuicals社のExtraction-free EIA kit等を使うのがいいかなと思っておりますが、何かELISAにおけるライセートのバックグラウンドを減らす良い方法をご存知の方いらっしゃいましたらアドバイスをよろしくお願いします。 なお、今後培養細胞でもペプチドを発現させる予定ですので、そちらについても経験のある方、アドバイスいただければと思います。 よろしくお願いいたします。

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