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(無題) 削除/引用 No.6849-7 - 2018/04/21 (土) 01:30:32 - RRNA ちょっと立て込んでいてお礼を言うのが遅れてしまい申し訳ありません。 様々な情報・アドバイスどうもありがとうございました！ APさんご指摘の話、まさにそうですね…。Pre-rRNAの印象で、飛び飛びだからプロセシング後のRNAを使わないと、と勘違いしていましたが、各「xS rRNA」は、ひとつながりなので、普通にゲノムからいけますね…。もっと落ち着いて考えてから物事を話すべきでした。 おおさんの2つ目の話は、実は修飾されていないrRNAが欲しいというのが目的で、そのため転写をしたいという話だった感じです。 その辺も、質問の時点で明示すべき重要なポイントでしたね。 色々ありがとうございました。 28Sでも、ひょっとしたらいけるかもしれない、ということなので、チャレンジしてみようかと思います。

(無題) 削除/引用 No.6849-6 - 2018/04/19 (木) 12:01:24 - xyz 修飾されたrRNAの逆転写とcDNAクローニングに詳しいサイト https://www.labome.com/method/Research-Methods-for-Detection-and-Quantitation-of-RNA-Modifications.html

(無題) 削除/引用 No.6849-5 - 2018/04/19 (木) 11:16:11 - おお rRNAは修飾されているのでそれをRTするとどうだろう、、、 細胞や組織からRNAを抽出して、ゲルで流して切り出したりして精製して使うとかしたほうがステップは少なそうだけど。

(無題) 削除/引用 No.6849-4 - 2018/04/17 (火) 13:01:52 - AP 単純な疑問だが、rRNAのcDNAをとる必要があるのだろうか。rRNAコード領域（rDNA)をクローニングすればいいんじゃないか？

(無題) 削除/引用 No.6849-3 - 2018/04/17 (火) 10:58:27 - あかね ivtは10kくらいまで平気で大丈夫です。 以前、RNAウイルスのIVTをルーチンでやってました。 おそらくもっと大きいものでも大丈夫でしょう。

(無題) 削除/引用 No.6849-2 - 2018/04/17 (火) 10:54:29 - おお 18S, 28SはIn vitro transcriptionにはちょっと大きすぎるように思えます。１kあたりからどんどん効率が下がっていくので、、、特殊なやり方があれば別ですが。

rRNAをクローニングしてin vitro転写したい 削除/引用 No.6849-1 - 2018/04/17 (火) 07:18:25 - RRNA in vitro転写したrRNAを使ってみたくなりまして、rRNAをpGEMベクターなりに組み込んでみようかなと思っているのですが、HEK293から取ってきたトータルRNAを逆転写→PCR→TAクローニングという単純なステップで可能でしょうか？ できれば、5S, 5.8S, 18S, 28S全部揃えられたらいいんですが、さすがに高次構造をとるrRNAですと、逆転写はもちろんのこと、仮にクローニングができてもin vitro転写するのは難しいでしょうか？ ご助言いただけると幸いです。

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