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(無題) 削除/引用 No.6953-5 - 2018/05/29 (火) 13:05:53 - あ 皆様、ありがとうございます。 大変勉強になりました。 今から、ゲル抽出＆ライゲーションしてみます。 今後もどうぞよろしくお願いします。

(無題) 削除/引用 No.6953-4 - 2018/05/29 (火) 10:21:55 - AP あなたの研究室の流儀はそうかもしれませんが、 泳動前のPCI処理は必要ないし、そんなことしている研究室はまずないだろうと思います。そもそもPCIはなるべく使用しないようになっているのが現状で（Hazerdous、廃液処理の問題）、めったにやることがないため常備していない研究室も少なくないと思います。 >PCIを行わなくても、制限酵素処理がうまく行っていれば、ゲル抽出をして、そのままligationに用いても構わないものでしょうか？ 良いです。泳動とゲル抽出の処理でPCI以上の精製ができます。

(無題) 削除/引用 No.6953-3 - 2018/05/29 (火) 02:22:40 - おお >本題なのですが、PCIを行わなくても、制限酵素処理がうまく行っていれば、ゲル抽出をして、そのままligationに用いても構わないものでしょうか？ ok

(無題) 削除/引用 No.6953-2 - 2018/05/28 (月) 21:56:26 - mon 必須ではありません。 切断後にもDNAに結合している制限酵素が希にある（何だったかな？）ので、このような酵素を使った場合はPCIは必要です。 しかしそのような制限酵素でも、SDSが含まれる色素液を使えばほとんどの場合PCIは不要です。 https://www.nebj.jp/products/detail/1358 制限酵素処理＞ゲル抽出＞ligationで、普通に問題ないですよ。

制限酵素処理後のPCI処理を忘れて電気泳動 削除/引用 No.6953-1 - 2018/05/28 (月) 21:44:26 - あ 稚拙な質問で申し訳ないのですが、研究室の制限酵素処理のプロトコルには、制限酵素で切断した後、PCI処理を行ったのち電気泳動となっているのですが、間違えて制限酵素処理後すぐさま電気泳動を行っていしまいました。 電気泳動の結果は目的バンドは観察されるですが、10塩基くらいしか切断前と変わらないため、本当に制限酵素処理が適切に行えたのかわかりません。一様コントロールとして制限酵素処理前を流したのですが、差が見られませんでした。 そのことはPCIを忘れたことと直接関係ないかもしれませんが。 本題なのですが、PCIを行わなくても、制限酵素処理がうまく行っていれば、ゲル抽出をして、そのままligationに用いても構わないものでしょうか？ 制限酵素処理後のPCI処理というのは必須の操作なのでしょうか？ どなたかご教授くだされば幸いです。

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