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(無題) 削除/引用 No.7079-8 - 2018/07/14 (土) 13:34:33 - xyz テンプレートはcDNAとのことでRNAから逆転写して合成しているのだと思いますが、 以前に学生が初めてcDNA合成したときに、RT-PCR産物の電気泳動で詰まってたり、ありえないほど上の方にシグナルが出ていたことがありました。このケースでは結局、RNA抽出時にゲノムDNAの除去が不十分でcDNAがキレイに合成出来ていなかったことが原因でした。サンプルによってRT-PCRがかかったりかからなかったりもしており、抽出したRNAからDNase処理を丁寧にやり直したら問題は解決したようです。

(無題) 削除/引用 No.7079-7 - 2018/07/14 (土) 09:40:43 - こん 制限酵素処理はしてないですよね？ PCR産物を精製しないでそのまま 制限酵素処理をして、さらに精製しないでゲルに流すと 詰まることがあります。 （ＳＤＳ入りのloading dyeで改善できます。ニッポンジーンとかで売っています）

(無題) 削除/引用 No.7079-6 - 2018/07/14 (土) 09:38:00 - み 分子量マーカー（DNA Ladder)は問題なく流れているのでしょうね？

(無題) 削除/引用 No.7079-5 - 2018/07/14 (土) 09:24:48 - なぞ AP様、今度はPCRがかかりませんでした。ダメですね。 他の組織由来のcDNAでやってみます。 重合なんてことが起きるんですね。知りませんでした。

(無題) 削除/引用 No.7079-4 - 2018/07/14 (土) 08:28:35 - AP PCR産物が重合しているんでしょう。 サイクル数を下げたり、鋳型DNAをもっと希釈してみましょう。

(無題) 削除/引用 No.7079-3 - 2018/07/14 (土) 06:36:38 - なぞ おお様。 そうですか。もう一度だけアニール温度をあげて挑戦してみて、ダメなら諦めることにします。

(無題) 削除/引用 No.7079-2 - 2018/07/14 (土) 06:27:41 - おお PCRがうまくかかってなく、ウェルに詰まっているのはノンスペかなにかでしょう。

PCR産物が流れない 削除/引用 No.7079-1 - 2018/07/14 (土) 06:25:47 - なぞ PCRをかけましたが、一つはうまくバンドが出て、もう一つの方ではゲルのウェルのところに留まってるようで泳動されていないみたいです。これはなぜでしょうか？それぞれ1.5、2.5kbです。ちゃんとグリセロール入りのダイと混ぜてるんですが。

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