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(無題) 削除/引用 No.708-8 - 2012/07/04 (水) 20:28:02 - Harmonia となると、 ＞ひとつのセルにはひとつのDNAしか入れてはだめ というのは、キュベットの意味だったりして？

(無題) 削除/引用 No.708-7 - 2012/07/04 (水) 19:10:53 - AP >質問の文脈からelectroporationだと分かるが、 頭書の質問ではどちらともとれるな。

(無題) 削除/引用 No.708-6 - 2012/07/04 (水) 18:34:06 - R >古来、EPはelectrophoresisの省略だったんだけれど。 質問の文脈からelectroporationだと分かるが、 >EPは他研は知りませんが、 身内のスラングを用いて、身内以外に質問するのは避けた方がよいです。 (掲示板に限らず実社会においても) プラスミド量については、細胞の状態によりけりですがあまり気にせず、 ミニプレップ等で調製したのを10-100倍希釈してました。 (基本、薄い方が良い) コンピテントセルを購入しているのであれば、1 ug使用時のCFUが記載されているでしょうからそちらを参考に。 (というか、コンピテントセルのCFUを確かめないと答えは出ないかもね。)

ありがとうございました。 削除/引用 No.708-5 - 2012/07/04 (水) 18:17:44 - もも 痒いところまで詳しく説明していただき感謝します！ EPは他研は知りませんが、うちはelectroporationの略で通ってます。電気泳動は、まんま電気泳動とよびます。

(無題) 削除/引用 No.708-4 - 2012/07/04 (水) 18:00:12 - AP 衝撃 EP = electroporationだったの！！！ 古来、EPはelectrophoresisの省略だったんだけれど。 まぎらわしいいなあ、それは勘弁してほしいなあ。 electroporationの形質転換効率は、10^9 cfu/ug pUC (3 kbくらいのプラスミド）くらいのはずですから（electrocompetent cellの出来具合、保存状態にもよる）、1 pgもあれば1000個くらいコロニーが出る計算です。プレートにまくのを1/10量にしたとして（1 mLで回復培養後、100 uLをまくとか）100 コロニーでちょうどいいくらい。 もちろん、プラクティカルには10個出ようが10000個出ようが、最終的に使うコロニーは一個なので、わざわざプラスミドを希釈なんかしないで、少量、適当に入れればいいんですけれど。形質転換効率を計算するとか、ライブラリーを作るとかの場合、プラスミドが過剰にならないようにしたほうがいいですけれど。プラスミド量が多くなるとプラスミド量あたりの形質転換効率が下がってくるからです。

ありがとうございます。 削除/引用 No.708-3 - 2012/07/04 (水) 16:56:24 - もも まだ実験初心者で、ようやくEPという作業にはいるのですが、そのまえに使用するDNA量について調べるように言われ、あまり具体的な答えが見つからず困ってました。装置の説明書を読めばよいのですね。ありがとうございました。 菌は大腸菌のDH5aで、pET-28a(+)を導入します。たしか、ひとつのセルにはひとつのDNAしか入れてはだめ、みたいな話を聞いたことがあるのですが、この場合はpET28a(+)という一種のDNAしか使わないので、別にひとつの大腸菌に２つ以上入ろうが問題ない気がするのですが、どうなのでしょうか。

大腸菌？細胞？動物個体？ 削除/引用 No.708-2 - 2012/07/04 (水) 14:59:12 - ~ あらかじめ調べておいたその装置・条件での形質転換効率の値を基に、 目的を達成できると考えられる量くらいです。 貴方が装置を作ったのでない限りは、装置のメーカーは標準的なプロトコルを提供するでしょう。

EPに用いるプラスミド量 削除/引用 No.708-1 - 2012/07/04 (水) 14:51:07 - もも EPに用いるプラスミドの濃度はわかっています。EPに必要なプラスミド量とな、どのくらいでしょうか。

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