全2件 ( 1 〜 2 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

(無題) 削除/引用 No.711-2 - 2012/07/04 (水) 21:49:10 - qq ＞考えられる原因は何が挙げられるでしょうか。 原因はご自身で考えるとして、８M尿素のまま、sepharoseCL4Bあたりで変性条件のゲルろ過（精密分画）は如何がでしょうか。テーリングしなければ、分離が期待できます。 ＞ベッドボリュームはレジンの結合容量の1/50程度です。 ロードするタンパク量がレジンの結合容量の1/50程度ですよね？？ ＞精製後のリフォールディング条件の検討は済んでいます。 精製できていないのだからそんなはずはなかろう？と思うのですが、仮にリフォールディングできるのであれば、リフォールディングしたタンパクをカラム精製する方が、よろしいです。 外膜タンパク質とのことですが、カラムワークで４M尿素だけですが、界面活性剤を使わなくて大丈夫なのでしょうか？

タンパク質の精製（レジンへの吸着について） 削除/引用 No.711-1 - 2012/07/04 (水) 20:05:53 - taku 初めまして。M1のtakuと申します。 現在、外膜タンパク質の精製を行っています。 大腸菌で高発現させた封入体を8M尿素で可溶化したのち、カラムで精製しようとしているのですが、レジンに全くタンパク質が吸着しません。 今までDEAE、Q-sepharose、Butylのレジンを試してきましたが、全てフロースルーで溶出してしまいます。 考えられる原因は何が挙げられるでしょうか。 <タンパク質について> pI 5.6、40 kDa でタグは付けていません。 使用前に凝集を防ぐため２倍に希釈しています。 ベッドボリュームはレジンの結合容量の1/50程度です。 余談ですが、精製後のリフォールディング条件の検討は済んでいます。 <バッファーについて> 20 mM Tris-HCl pH 8.0、4 M 尿素、1 mM DTTです。 レジンの10倍以上の量でバッファー置換しています。 他に必要な情報があれば追記します。 どうかお力をお貸し下さい。宜しくお願い致します。

全2件 ( 1 〜 2 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

パスワードを入力してチェックした記事を

チェックした記事を

このトピックにメッセージを投稿する 名前  メール  　アドレス非公開    タイトル  本文       設定  クッキーを保存（次回の入力の手間を省けます） 上に上げない（トピックの一覧で一番上に移動させません） 解決（問題が解決した際にチェックしてください） 暗証  半角英数字8-12文字の暗証番号を入れると、あとで削除、修正ができます。 送信

---

〔使い方〕 「アドレス非公開」をチェックすれば、自分のメールアドレスを公開しないで他の方からメールを受け取れます。 問題が解決した際には、解決ボタンをチェックして解決した旨のコメントをつけてください。これは、初めにトピックを作った人と管理人のみが可能です。 半角カタカナ、機種依存文字(全角ローマ数字、○の中の数字等)は文字化けの原因となりますので使わないでください。

---