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浮遊細胞の遠心について トピック削除
No.7111-TOPIC - 2018/07/30 (月) 17:33:30 - Ramos
最近浮遊細胞を購入し培養し始めました

細胞の増殖を確認し、凍結や培地交換のために遠心を試みたのですが、沈殿が見えません(条件は4℃,1500RPM,5min です)

考えられる原因や工夫点がありましたらご教授ください

・ちなみに細胞を立ち上げた時は遠心で沈殿を確認することができました
・Dishから遠沈管へ移す時はピペッティングを行いました(やり方が悪い?)
・コンフルの見極めが悪く細胞数が少ないという可能性も考えています
 
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おお さん 削除/引用
No.7111-7 - 2018/07/31 (火) 09:05:25 - Ramos
返信ありがとうございます

はい、カウントします...
遠心後の上澄も観察してみます

細胞名はRamosです

(無題) 削除/引用
No.7111-6 - 2018/07/31 (火) 02:42:53 - おお
>コンフルの見極めが悪く細胞数が少ないという可能性も考えています

面倒かもしれませんが、慣れるまでは細胞をカウントしてください。

遠心まえ、遠心してから再けんだくした状態で細胞を観察すれば回収率なども大体分かるでしょう。遠心した上澄には細胞が残ってませんよね。確かにお示しの条件では細胞は落ちているでしょうけど(ただgでどれくらいかわからないけど)。

あと、細胞名は開示できますか?

み さん 削除/引用
No.7111-5 - 2018/07/30 (月) 18:46:44 - Ramos
返信ありがとうございます

次回実験する際に確認してみます

(無題) 削除/引用
No.7111-4 - 2018/07/30 (月) 18:25:14 - み
沈殿があると仮定してfresh mediumに懸濁して細胞がロスなく継代されていれば良いでしょう。その辺りどうなんですか?

m さん 削除/引用
No.7111-3 - 2018/07/30 (月) 18:13:26 - Ramos
返信ありがとうございます

ということは遠沈管に細胞が少ない可能性が高いということですね...
培養している別のDishはもう少し増殖するのを待ってみようと思います

(無題) 削除/引用
No.7111-2 - 2018/07/30 (月) 18:00:25 - m
よっぽどの事がないかぎりその条件で遠心して沈殿しないって事は無いと思います。
4℃で行っているのは気になりますが。

細胞数がかなり少ないか、(コンフルの見極めが甘い)
浮遊だからと上清を集めたけど
接着細胞もあって回収し切れていない...とかですかね

浮遊細胞の遠心について 削除/引用
No.7111-1 - 2018/07/30 (月) 17:33:30 - Ramos
最近浮遊細胞を購入し培養し始めました

細胞の増殖を確認し、凍結や培地交換のために遠心を試みたのですが、沈殿が見えません(条件は4℃,1500RPM,5min です)

考えられる原因や工夫点がありましたらご教授ください

・ちなみに細胞を立ち上げた時は遠心で沈殿を確認することができました
・Dishから遠沈管へ移す時はピペッティングを行いました(やり方が悪い?)
・コンフルの見極めが悪く細胞数が少ないという可能性も考えています

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