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HEK 293 in low serum media トピック削除
No.7113-TOPIC - 2018/07/31 (火) 05:40:59 - おお
HEK 293 Cellsですが（Low serum adaptedとかじゃなく）、低い血清濃度、またはSerum Freeで細胞の増殖を抑制した状態で実験しようかと思います。どのくらいの濃度まで下げれるのか等皆さんの経験や文献でみた条件などあれば教えてください。
　
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No.7113-8 - 2018/08/04 (土) 07:27:17 - moz
>[Re:7] おおさんは書きました :
> advance DMEMであえて血清を加えないという指摘でしょうか？
そうです。HEK293細胞はadvance DMEM+2%FBSでもDMEM+10%FBSと遜色なく（〜やや遅い？）増殖し、１%だとかなり増殖が遅くなったと記憶しています。
実験によってはこれが問題になる可能性もありますね。advance DMEMに含まれているのはIGFかな？どこかで組成が公開されていたような。。なお、ITSにはIGFではなく安価な組換えInsulinが（過剰量）含まれています。Insulinは親和性は低いもののIGF1-Rを刺激して生存シグナルを伝えるようです。
BSAによる脂質の補充には、GibcoのCD-Liquid concentrateで代替できると思います。

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No.7113-7 - 2018/08/04 (土) 05:03:36 - おお
ありがとうございました。BSAが細胞の状態の維持にあったほうがいいというのは確かにそういう話を聞きますね。たとえば２％FCSなどではBSAは不十分でしょうか?。

advance DMEMなどは入っている（たぶん）IGFなどのため、低血清（１ー２％）で通常の培養と同じような増殖をさせることができるものと思っていますが、advance DMEMであえて血清を加えないという指摘でしょうか？

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No.7113-6 - 2018/08/02 (木) 09:45:11 - mon
advance DMEM培地のようなITSやBSA（脂質）が添加されたものだとダメージは少ないと思います。

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No.7113-5 - 2018/08/02 (木) 04:08:57 - おお
ありがとうございました。なるほど、そうですね。細胞の密度は影響しそうな気が私もします。説明不足だったような気がしますが、今考えているのは血清をできるだけ下げる、フリーにするとかそういうのが主目的ではなく、少し長い間Treatmentをするので、生理的にAcceptableな状態で増殖を抑制できればいいかなと思ってます。

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No.7113-4 - 2018/08/01 (水) 12:37:44 - あrwでfhgjkj
たいていの株細胞は１晩くらいなら無血清でも余裕でいけるとおもいます。
よわいのはserum freeに弱い細胞は血清濃度を10%→5%→1%→0%みたいに段階的に下げていくとよいみたいな説明を見た事あります。あと増殖状態でもかなり変わるように思います。コンフレンしーが100%に近い方が無血清に強い気がします。

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No.7113-3 - 2018/08/01 (水) 12:01:22 - おお
ありがとうございました。無血清でもまあまあ生き残るのですね。

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No.7113-2 - 2018/08/01 (水) 09:23:27 - GFP
HEK293でやった事はないですが、HEK293Tの場合は、無血清サブコンフルエントで数日培養可能と思います（あくまで個人的経験に基づいており、普遍的かどうかは不明です）。多少浮遊する死細胞が増えますので、細胞死に関わる実験には向かないかもしれません。無血清でもBrdUの取り込みが多少残るので、増殖を完全に抑えるのは難しいかもしれません（洗いが悪くて少し血清が残っていた可能性も否定はできませんが）。

HEK 293 in low serum media 削除/引用
No.7113-1 - 2018/07/31 (火) 05:40:59 - おお
HEK 293 Cellsですが（Low serum adaptedとかじゃなく）、低い血清濃度、またはSerum Freeで細胞の増殖を抑制した状態で実験しようかと思います。どのくらいの濃度まで下げれるのか等皆さんの経験や文献でみた条件などあれば教えてください。
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