Bio Technical フォーラム

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リアルタイムPCR装置の購入について トピック削除
No.7114-TOPIC - 2018/08/01 (水) 22:06:52 - TM
所属研究室でリアルタイムPCR装置の購入を検討することになり色々と情報を探してみたのですが,購入時に考慮すべき仕様条件の順位付けがよく分からず質問させて下さい

購入目的としては,
・特定の培養条件における遺伝子発現を定量的に解析したい(具体的にはRhoAとRac1)
・リアルタイムPCR法を新たな評価技術として研究室に持ち込みたい
の二点です

周囲の研究室や技師の方々に聞いて回ったところ,
・PCRもしくはRT-PCR時の制御可能な温度範囲,温度精度や均一性
が重要なパラメタになるとお聞きしたのですが,温度関連以外にも重要な仕様条件は何かあるのでしょうか…….例えば,温度制御方式や蛍光ランプの種類等々です……

大学共用のリアルタイムPCR装置をそのまま購入できれば良いのですが,予算の関係でダウングレードせざるを得ず,どの仕様条件だけは確実に確保すべきなのか,お聞きできれば幸いです

何卒宜しくお願い致します
 
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(無題) 削除/引用
No.7114-10 - 2018/08/06 (月) 19:09:43 - AP
カタログ性能だけでなくインターフェースの使い勝手や試薬のコストなんかもあるので、実際使ってみないとわからない。
低価格帯の製品でも高額な買い物になるので、遠慮なくデモを頼むといい。
お試し用の試薬も提供してくれるよ。

ちなみにバイオラッドは昔からPCR関連装置で先頭集団だったけれど、特許の問題で数年間リアルタイムPCR装置の販売ができない時期があった。その後、権利を持っている会社(Texas Instrumentsだかどっか)を吸収することで、権利と技術の取り込みに成功して今に至る。

(無題) 削除/引用
No.7114-9 - 2018/08/06 (月) 11:24:59 - AA
共通機器にあるのはABIやRoche、
個別の研究室にあるのはバイオラッドやTakara、
という勝手な印象があります。

値段的にはタカラが安いんじゃないかなぁと思っています。
タカラは試薬も使いやすいです。
バイオラッドも悪い評判は聞きません。

(無題) 削除/引用
No.7114-8 - 2018/08/05 (日) 22:04:27 - TM
返信遅くなり誠に申し訳ございませんでした

>>Anoさん

アドバイスありがとうございました
バイオラッドの装置,非常にリコメンドが多いのですね!
参考にさせて頂きます,ありがとうございました

>>unoさん

異なる企業の試薬を使ってもバラつきの少ない時があるというお話は,予算的に厳しい状態で購入を検討している私にとって非常に有難いコメントです
お忙しい中,コメント頂きありがとうございました

>>TSさん

お忙しい中コメントを頂き恐縮です
学生のスキルに依存するとのコメント,襟を正して拝聴させて頂きました
マスターミックスには注意を払って,自身のスキル磨きにも注力していこうと思います
ありがとうございました

(無題) 削除/引用
No.7114-7 - 2018/08/03 (金) 17:59:48 - TS
横やりで恐縮です。

今後の参考までに教えていただきたいのですが、
バイオラッドのリアルタイムPCRって他社機種と比べて特筆するほど良いのですか?

これまでStepOneやLightCyclerを使ってきましたが、特段の不満もありませんでした。Ct値のばらつきなどの評価や比較は難しいですが、特に気になりませんでした。むしろ結局、学生の腕とスキルの影響の方がよっぽど大きいと感じます。

マスターミックスも有名どころを買っておけば、なんとなく大丈夫のような気持ちです。

細かいところを気にされている人の話を聞くと、自分は適当すぎるのかなぁと感じたり。。。

(無題) 削除/引用
No.7114-6 - 2018/08/03 (金) 17:29:41 - uno
>試薬キットとサーマルサイクラー(とソフトウェア)を同一メーカーで統一するのが安定した結果を得る上で重要

これってどれくらい信頼できるんでしょうか?

私のところではStepOne(ABI社)とABI社のmastermix、TaqManの組み合わせで
targetによってwell間のばらつきがほとんど無いものもあれば
すごくばらつく(beta actinでもCt値が1以上の差が出る)ものもあったのですが、
これはたまたまはずれの機体だったんでしょうか。

beta-actinのばらつきは結局他社のmaster mix(ABI社より安価)を採用することで解決しました。

(無題) 削除/引用
No.7114-5 - 2018/08/02 (木) 20:30:05 - Ano
以前はABIしか使わなかってけど、最近はバイオラッドばっか使ってます

ABIのパワーサイバーグリーンを、バイオラッドで使って、5年以上たつけど問題ない、というか他に乗り替える気がしない

(無題) 削除/引用
No.7114-4 - 2018/08/02 (木) 17:24:31 - TM
>>橘さん

お忙しい中,貴重なアドバイスありがとうございました
試薬の件は盲点でした
頂戴したアドバイスと製品カタログを比較して再検討したいと思います


>>えさん

貴重なアドバイスありがとうございます!
バイオラッド,再度調べてみます
ご多忙の中ありがとうございました

(無題) 削除/引用
No.7114-3 - 2018/08/02 (木) 12:43:37 - え
バイオラッド一択でしょう

(無題) 削除/引用
No.7114-2 - 2018/08/01 (水) 23:00:51 - 橘
定量PCRはPCRと異なり、試薬キットとサーマルサイクラー(とソフトウェア)を同一メーカーで統一するのが安定した結果を得る上で重要になります。ですから、サーマルサイクラー単独で評価することはできません。定量PCR用サーマルサイクラーは出しているが試薬は出していない、というメーカーは、余計な苦労をすることになるのであまりおすすめではありません(もちろん使えないわけではないでしょうけど)。というわけで、メーカーはサーモ(ABI)かタカラ(日本であれば)の2択で、他は考えなくていいと思います(強いて挙げればあとはロシュ)。それぞれメーカーの担当者におすすめの機種を訊いてデモ機を持ってきてもらって評価すればいいと思います。上記3社は温度制御・光学系はいずれも大きな問題はありません。機種によって一度のランで定量できるサンプル数、別のラン間で較正ができるか、対応できる色素、などが異なります。とりあえず、下記のサーモとタカラの資料はざっと目を通しましょう。
http://www.takara-bio.co.jp/prt/guide.htm
https://www.thermofisher.com/jp/ja/home/life-science/pcr/real-time-pcr/qpcr-education.html

リアルタイムPCR装置の購入について 削除/引用
No.7114-1 - 2018/08/01 (水) 22:06:52 - TM
所属研究室でリアルタイムPCR装置の購入を検討することになり色々と情報を探してみたのですが,購入時に考慮すべき仕様条件の順位付けがよく分からず質問させて下さい

購入目的としては,
・特定の培養条件における遺伝子発現を定量的に解析したい(具体的にはRhoAとRac1)
・リアルタイムPCR法を新たな評価技術として研究室に持ち込みたい
の二点です

周囲の研究室や技師の方々に聞いて回ったところ,
・PCRもしくはRT-PCR時の制御可能な温度範囲,温度精度や均一性
が重要なパラメタになるとお聞きしたのですが,温度関連以外にも重要な仕様条件は何かあるのでしょうか…….例えば,温度制御方式や蛍光ランプの種類等々です……

大学共用のリアルタイムPCR装置をそのまま購入できれば良いのですが,予算の関係でダウングレードせざるを得ず,どの仕様条件だけは確実に確保すべきなのか,お聞きできれば幸いです

何卒宜しくお願い致します

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