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(無題) 削除/引用 No.7179-5 - 2018/08/29 (水) 01:38:16 - おお ESのホモろガスリコンビネーションはCRISPRを使う以前からよく使う手法でそこそこ効率はいいです（マウスの場合で人やさるなどはよくわかりません）。やっている研究室ならそんなに面倒とまでは言えないでしょう。

(無題) 削除/引用 No.7179-4 - 2018/08/29 (水) 01:35:01 - おお もし、その遺伝子がゲノム上で数キロであれば翻訳開始コドンがあるエクソンから終了コドンがあるエクソンまでPCRで増幅して発現ベクターに組み込むという手も取れます（ながければ長いほど難しくはなりますけど３０から４０kbぐらいまではカタログなどでは増幅できています）。その後Site direct mutagenesisをかければいいかと。 まえに示したMinigeneもSite direct mutagenesisでスプライシング異常をみるような実験系がくめます。

(無題) 削除/引用 No.7179-3 - 2018/08/28 (火) 13:47:59 - asan 実験の目的にもよりますが、その研究テーマにおいてクリティカルだと思われるイントロンの点変異を作ることをクリスパーでやるのが煩雑だといってたらそんな研究できないだろうと思います。 点変異のスプライシング等への影響だけ見たいならミニジーンを293TやHeLaなんかに導入してスプライシング異常をモニターする系は簡単に作れますけどね。 それか、そうした変異が有名ならばその変異を持つ細胞株を世の中で出回ってるのを探してくるとかですかね。 マウスES細胞でよければCRISPR+ssODNでノックインして点変異を入れるぐらいなら簡単です。

(無題) 削除/引用 No.7179-2 - 2018/08/28 (火) 01:29:32 - おお Minigeneをつくればいいかと思いますが、イントロンが長すぎて作りにくい場合は以下のベクターが使われることがあります。 https://www.mobitec.com/cms/products/bio/04_vector_sys/exontrap.html

簡便にイントロンに1塩基置換をする方法 削除/引用 No.7179-1 - 2018/08/28 (火) 00:51:44 - くりっく イントロンドナーの変異を見つけました。 ただ患者さんはすでに亡くなられており細胞を採取できません。 そこでなにか細胞に、その変異を導入して、解析したいです。 一番手っ取り早く行う方法って何がありますか？ 相同組換えを利用したクリスパーシステムは煩雑ですし、、、 ご意見聞かせてもらえると嬉しいです。

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