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バキュロウイルス発現系を用いたタンパク発現について トピック削除
No.7229-TOPIC - 2018/09/13 (木) 16:21:57 - えっぺん
いつも拝見させていただいております。

現在、バキュロウイルスを用いたタンパクの発現を行っています。(invitrogenで購入したBac-to-Bac を使っています)

P3までの作製には成功し、Sf21細胞に感染させましたが発現が見られませんでした。

タイターチェックを行わず、1.0×106 cells/mL の細胞密度という条件で行いました。
細胞がはがれるなどの感染兆候は見られましたがタンパク発現は見られないという状況です。

そこで質問なのですが、やはりタイターチェックはしたほうが良いのか
タイターが高すぎると発現に影響があるのかお伺いしたいです。
 
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(無題) 削除/引用
No.7229-4 - 2018/09/13 (木) 21:53:15 - Chiro
そもそもp1やp2では発現は見られてました?

(無題) 削除/引用
No.7229-3 - 2018/09/13 (木) 17:02:19 - AP
タイターチェックが面倒なら、ウイルス液の希釈系列で感染させたものを何段階か並行しておこなう。

(無題) 削除/引用
No.7229-2 - 2018/09/13 (木) 16:59:53 - AP
>タイターが高すぎると発現に影響があるのかお伺いしたいです。
タンパク質を発現する前に細胞が死んじまう。

バキュロウイルス発現系を用いたタンパク発現について 削除/引用
No.7229-1 - 2018/09/13 (木) 16:21:57 - えっぺん
いつも拝見させていただいております。

現在、バキュロウイルスを用いたタンパクの発現を行っています。(invitrogenで購入したBac-to-Bac を使っています)

P3までの作製には成功し、Sf21細胞に感染させましたが発現が見られませんでした。

タイターチェックを行わず、1.0×106 cells/mL の細胞密度という条件で行いました。
細胞がはがれるなどの感染兆候は見られましたがタンパク発現は見られないという状況です。

そこで質問なのですが、やはりタイターチェックはしたほうが良いのか
タイターが高すぎると発現に影響があるのかお伺いしたいです。

4件 ( 1 〜 4 )  前 | 次  1/ 1. /1


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