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COS7での分泌タンパク質産生に用いる培地組成 トピック削除
No.7255-TOPIC - 2018/09/24 (月) 15:19:25 - チャコ
この度、COS7での分泌タンパク質産生を行い、mgオーダーのタンパク質を得たいです。
その際の培地の組成に関して質問させてもらえないでしょうか?

組換えタンパク質はhuman IgG2 Fcとの融合タンパク質です。
プレリミから、プロテインAビーズにつくことは確認してます。

牛胎児血清はIgGが含まれるので使えないとして、また、IgGを極微量しか含まないような牛胎児血清は買えません。予め牛胎児血清からIgG画分を除くというのもありではありますが、純度の高い組換えタンパク質を作成したいため少量のコンタミも問題になります。

そこで血清を含まない培地で作成をしようと思っています。

これまでに、OPTIMEM1に、P/Sと、1x ITSを加えたもので試したところ、うまく行っています。それ以外の培地で、よりタンパク質産生を促進させるような培地組成をご存知でしたらご教示いただけませんでしょうか?

よろしくお願いいたします。
 
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(無題) 削除/引用
No.7255-3 - 2018/11/15 (木) 17:37:01 - AP

(無題) 削除/引用
No.7255-2 - 2018/09/24 (月) 16:06:41 - mon
タンパク産生には、アミノ酸の補充+エネルギー源の補充が重要なので、
0.5% Yeast Extract (TC-Yeastlate)添加はいかがでしょうか。Glucose添加も場合により必要かも。30% Stock溶液を作りました。
COS細胞ではないですが、293細胞では以下の組成で組換えタンパクを産生させたことはあります。
DMEM/F12+ITS+1/200 vol. GIBCO CD-Liquids +0.5% Yeast Extract (TC-Yeastlate)

COS7での分泌タンパク質産生に用いる培地組成 削除/引用
No.7255-1 - 2018/09/24 (月) 15:19:25 - チャコ
この度、COS7での分泌タンパク質産生を行い、mgオーダーのタンパク質を得たいです。
その際の培地の組成に関して質問させてもらえないでしょうか?

組換えタンパク質はhuman IgG2 Fcとの融合タンパク質です。
プレリミから、プロテインAビーズにつくことは確認してます。

牛胎児血清はIgGが含まれるので使えないとして、また、IgGを極微量しか含まないような牛胎児血清は買えません。予め牛胎児血清からIgG画分を除くというのもありではありますが、純度の高い組換えタンパク質を作成したいため少量のコンタミも問題になります。

そこで血清を含まない培地で作成をしようと思っています。

これまでに、OPTIMEM1に、P/Sと、1x ITSを加えたもので試したところ、うまく行っています。それ以外の培地で、よりタンパク質産生を促進させるような培地組成をご存知でしたらご教示いただけませんでしょうか?

よろしくお願いいたします。

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