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488nmで励起され、かつ傾向顕微鏡にも使える明るい蛍光 トピック削除
No.7258-TOPIC - 2018/09/25 (火) 01:35:38 - FCM
いつも勉強させてもらっています。

細胞膜表面のタンパク質に対する抗体で、直接標識のものを購入予定です。

488nmで励起し、その蛍光をフローサイトメーターで検出するのと並行して、蛍光顕微鏡でも画像取得したいです。ただ、発現レベルがおそらく低いと予想され、そのため明るい蛍光団を用いようと思っています。

当方、フローサイトばかりを行なって来たこともあり、PEやPE-Cy7は非常に明るい蛍光だと理解していますが、このいずれも蛍光顕微鏡で観察すると非常に早く蛍光が失われてしまい、目的の画像取得が叶いませんでした。

そこで、488nm(当方のサイトメーターがこのレーザーしか搭載されていません)で励起され、かつ蛍光顕微鏡にも耐えうる、明るい蛍光を探しています。

Alexa488はフローでは非常に弱いです。
この辺に明るい方がいらっしゃいましたら、ご教授いただけますと幸いです。
 
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No.7258-6 - 2018/09/26 (水) 15:08:52 - TIK
使ったことないし、また種類が限られてるけど、スペックではこれ。
ttp://www.bdbiosciences.com/us/go/brilliantblue

(無題) 削除/引用
No.7258-5 - 2018/09/25 (火) 12:55:58 - moz
Alexaより明るいAlexa Fluor Plusをセールマンは薦めていましたよ(Plusは使用経験なし)。

(無題) 削除/引用
No.7258-3 - 2018/09/25 (火) 05:27:13 - FCM
おお先生、

PEなんかはFCMではmost brightest fluorescentとして知られていますが、その抗体で染めた組織などはレーザーを当てると瞬時に退色しています...

無難がAlexa488なんでしょうけれど、何かいい蛍光はないかなあと悩んでいます。

(無題) 削除/引用
No.7258-2 - 2018/09/25 (火) 04:15:30 - おお
>Alexa488はフローでは非常に弱いです。
顕微鏡では露光時間もかなりの幅で調節できますし、退色という意味でもAlexaはメリットがあると聞きましたが。。。実際比べた使用経験ではないですが、、、

488nmで励起され、かつ傾向顕微鏡にも使える明るい蛍光 削除/引用
No.7258-1 - 2018/09/25 (火) 01:35:38 - FCM
いつも勉強させてもらっています。

細胞膜表面のタンパク質に対する抗体で、直接標識のものを購入予定です。

488nmで励起し、その蛍光をフローサイトメーターで検出するのと並行して、蛍光顕微鏡でも画像取得したいです。ただ、発現レベルがおそらく低いと予想され、そのため明るい蛍光団を用いようと思っています。

当方、フローサイトばかりを行なって来たこともあり、PEやPE-Cy7は非常に明るい蛍光だと理解していますが、このいずれも蛍光顕微鏡で観察すると非常に早く蛍光が失われてしまい、目的の画像取得が叶いませんでした。

そこで、488nm(当方のサイトメーターがこのレーザーしか搭載されていません)で励起され、かつ蛍光顕微鏡にも耐えうる、明るい蛍光を探しています。

Alexa488はフローでは非常に弱いです。
この辺に明るい方がいらっしゃいましたら、ご教授いただけますと幸いです。

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