Bio Technical フォーラム

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ウイルスからcDNAを合成する トピック削除
No.7262-TOPIC - 2018/09/25 (火) 18:04:44 - cotton
日々拝見しお世話になっております。

一本鎖(-)RNAウイルスからRNAを抽出し、のちにPCRによってプラスミドに組み込むインサートを作れるようなcDNAを合成したいと考えております。
いくつか不明点があり、検索をしても解決に辿りつけなかった為ご教授ください。

@ ウイルスから抽出したRNAから"クローニングに用いるような"cDNAを合成したい場合、逆転写反応の際に用いるプライマーとして適切なものは何でしょうか。
ランダムヘキサマーはqPCR用で不適ではないかと考えております。
また、Oligo dTが利用できるのかが分かりません。

A @で特異的プライマーが必要となった場合、逆転写反応で用いるのはセンス/アンチセンスプライマーのどちらでしょうか。
「一本鎖(-)RNAウイルス」という条件に内心で引っかかっています。

非常に基本的なことかもしれませんが、どうぞよろしくお願い致します。
 
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(無題) 削除/引用
No.7262-4 - 2018/09/26 (水) 07:46:51 - こっとん
というかこいつが面倒くさいだけか

(無題) 解決済み 削除/引用
No.7262-3 - 2018/09/26 (水) 07:45:42 - こっとん
これだから嫌いなんだよなここ

(無題) 削除/引用
No.7262-2 - 2018/09/25 (火) 19:41:56 - おお
>また、Oligo dTが利用できるのかが分かりません。

あなたのウイルスがどのように増殖するのか知らないのですか?

>特異的プライマーが必要となった場合、逆転写反応で用いるのはセンス/アンチセンスプライマーのどちらでしょうか。

そのウイルスのRNAの3’末端にアニーリングする配列なのは明らかなのにそれが分からないというのは、やはりあなたのウイルスがどのように増殖するのか知らないのですか?

ウイルスからcDNAを合成する 削除/引用
No.7262-1 - 2018/09/25 (火) 18:04:44 - cotton
日々拝見しお世話になっております。

一本鎖(-)RNAウイルスからRNAを抽出し、のちにPCRによってプラスミドに組み込むインサートを作れるようなcDNAを合成したいと考えております。
いくつか不明点があり、検索をしても解決に辿りつけなかった為ご教授ください。

@ ウイルスから抽出したRNAから"クローニングに用いるような"cDNAを合成したい場合、逆転写反応の際に用いるプライマーとして適切なものは何でしょうか。
ランダムヘキサマーはqPCR用で不適ではないかと考えております。
また、Oligo dTが利用できるのかが分かりません。

A @で特異的プライマーが必要となった場合、逆転写反応で用いるのはセンス/アンチセンスプライマーのどちらでしょうか。
「一本鎖(-)RNAウイルス」という条件に内心で引っかかっています。

非常に基本的なことかもしれませんが、どうぞよろしくお願い致します。

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