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細胞播種の偏りとプレートのコラーゲンコート トピック削除
No.7295-TOPIC - 2018/10/07 (日) 22:17:51 - 研究初心者
研究初心者です。

細胞をコラーゲンコートした12well plateに播種する際、どうしても細胞が中央に寄ってきてしまいます。インキュベーターの振動などで中央に寄ることもあるとのことで、播種して細胞が均一に分布しているのを確認してから、しばらくクリーンベンチ内で静置してみたのですが、30分後に確認するとやはり細胞が中央部に密集していました。

もしかするとプレートに施したコラーゲンコートの厚みが均一でない(中央部がへこんでいる)のかなと考えたのですが、コートの厚みが播種時の細胞分布に影響することはあるのでしょうか?また、細胞が中央に寄ってくる原因として他に考えられるものはありますか?

コラーゲンコートはcell matrixを用い、ウェルに添加した後ピペットで回収し、クリーンベンチ内で数日間乾燥させて使っています。

もしご存知の方がいらっしゃいましたらどうか教えてください。
 
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(無題) 削除/引用
No.7295-4 - 2018/10/12 (金) 18:41:56 - 研究初心者

皆さまご回答ありがとうございます。

早速試してみたいと思います。

(無題) 削除/引用
No.7295-3 - 2018/10/08 (月) 06:15:04 - mon
>播種して細胞が均一に分布しているのを確認してから、しばらくクリーンベンチ内で静置してみた、というのは、
均一に分布しているのを「顕微鏡で」確認してから、「顕微鏡からクリーンベンチまでプレートを移動して」クリーンベンチ内で静置、ということでしょうか?
もしそうなら、「顕微鏡からクリーンベンチまでプレートを移動」したときに、培地が回転したのだと思います。
37℃に保温した培地で十分撹拌した細胞懸濁液をプレートに分注して、細胞が(弱く)接着するまで10〜30分程度クリーンベンチに放置してください。

(無題) 削除/引用
No.7295-2 - 2018/10/08 (月) 00:18:35 - おお
原因はおいといて、ちょっとだまされたと思ってまくときだけでも培地の量を減らして、表面張力で少し真ん中がへこむぐらいの量にしてみ。

細胞播種の偏りとプレートのコラーゲンコート 削除/引用
No.7295-1 - 2018/10/07 (日) 22:17:51 - 研究初心者
研究初心者です。

細胞をコラーゲンコートした12well plateに播種する際、どうしても細胞が中央に寄ってきてしまいます。インキュベーターの振動などで中央に寄ることもあるとのことで、播種して細胞が均一に分布しているのを確認してから、しばらくクリーンベンチ内で静置してみたのですが、30分後に確認するとやはり細胞が中央部に密集していました。

もしかするとプレートに施したコラーゲンコートの厚みが均一でない(中央部がへこんでいる)のかなと考えたのですが、コートの厚みが播種時の細胞分布に影響することはあるのでしょうか?また、細胞が中央に寄ってくる原因として他に考えられるものはありますか?

コラーゲンコートはcell matrixを用い、ウェルに添加した後ピペットで回収し、クリーンベンチ内で数日間乾燥させて使っています。

もしご存知の方がいらっしゃいましたらどうか教えてください。

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