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イオン交換クロマトのUV280について トピック削除
No.7324-TOPIC - 2018/10/17 (水) 14:14:04 - k. komiyakawa
疑問が2点あります。

イオン交換クロマトで溶出の際、NaClグラジェントをかけていると
UV280のベースラインがだんだん下がってしまいます。
NaClのグラジェントの際はいつもこのようなことが起こるのですが、
なぜこのようなことが起こるのかご存知のかたいらっしゃったら
教えていただきたいです。


また、溶出が終わった後1M NaClで満たされた流路を低塩濃度の平衡化バッファーで置換すると、UV280のピークが現れるのですが、
これもなぜでしょうか。


ご存知の方、いらっしゃったらぜひ教えていただきたいです。


どうぞよろしくお願いいたします。
 
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(無題) 削除/引用
No.7324-5 - 2018/10/19 (金) 10:16:49 - k.+komiyakawa+
>[Re:4] monさんは書きました :
> グラディエントは、A液 Buffer, B液 NaClの混合ですか?
> それとも、A液 Buffer, B液 Buffer+1M NaClの混合ですか?
> 前者だとBufferが薄まりますのでBuffer由来の吸光度が下がると思います。
> 後者でも、A液とB液の吸光度が異なれば(理由は不明)変化すると思います。
>


A液 Buffer: リン酸緩衝液
B液 Buffer: A液 + 1M NaCl
です。
他のバッファーでも同じ様にB液様に 1M NaClを混ぜても同じ様になります。

個別に吸光度はチェックしてみます。

(無題) 削除/引用
No.7324-4 - 2018/10/17 (水) 19:19:33 - mon
グラディエントは、A液 Buffer, B液 NaClの混合ですか?
それとも、A液 Buffer, B液 Buffer+1M NaClの混合ですか?
前者だとBufferが薄まりますのでBuffer由来の吸光度が下がると思います。
後者でも、A液とB液の吸光度が異なれば(理由は不明)変化すると思います。

(無題) 削除/引用
No.7324-3 - 2018/10/17 (水) 15:06:16 - k.+komiyakawa+
おお様

レスありがとうございます。

>単なる水に一滴1M NaClを落としたら、何かもやっとしたものが

あのもやったしたもの、UV検出器に引っかかるのですね。
ミキサーがあっても急激なNaCl濃度の変化の影響を受けてしまうのですね。。。

>サンプルをのせてない状態ですか?
サンプルが乗っていてもじわじわベースが下がっているがわかります。
サンプルを乗せないとベースラインのドリフトははっきりわかります。

(無題) 削除/引用
No.7324-2 - 2018/10/17 (水) 15:00:04 - おお
>NaClグラジェントをかけていると
>UV280のベースラインがだんだん下がってしまいます。

サンプルをのせてない状態ですか?

>後1M NaClで満たされた流路を低塩濃度の平衡化バッファーで

たとえば単なる水に一滴1M NaClを落としたら、何かもやっとしたものが見えることがありますよね。それと同じようなことが起こっているといえるでしょう。

イオン交換クロマトのUV280について 削除/引用
No.7324-1 - 2018/10/17 (水) 14:14:04 - k. komiyakawa
疑問が2点あります。

イオン交換クロマトで溶出の際、NaClグラジェントをかけていると
UV280のベースラインがだんだん下がってしまいます。
NaClのグラジェントの際はいつもこのようなことが起こるのですが、
なぜこのようなことが起こるのかご存知のかたいらっしゃったら
教えていただきたいです。


また、溶出が終わった後1M NaClで満たされた流路を低塩濃度の平衡化バッファーで置換すると、UV280のピークが現れるのですが、
これもなぜでしょうか。


ご存知の方、いらっしゃったらぜひ教えていただきたいです。


どうぞよろしくお願いいたします。

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