Bio Technical フォーラム

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ウェスタン検出 トピック削除
No.7347-TOPIC - 2018/10/25 (木) 16:01:34 - ちゃ
ウェスタンの検出に関する質問です。
データシートに抗体希釈をcangetで行うと書いてありましたが、研究室に無かったため、ブロッキング液である5%milkで希釈しました。
検出すると、全くバンドが出ません。
やはり、cangetとmilkでは検出感度がだいぶ違うのでしょうか?
BSAだと少しマシなどはあるのでしょうか
 
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(無題) 削除/引用
No.7347-4 - 2018/10/26 (金) 11:06:28 - ニ
何にたいする抗体ですか。

(無題) 削除/引用
No.7347-3 - 2018/10/25 (木) 17:43:30 - moz
抗体希釈をブロッキング時と同濃度の液だと、経験上感度は落ちます。
PBS-Tに1/100~1/50濃度程度のブロッキング剤添加が良い結果を得ています。まあ、ブロッキング剤を添加しなくても成功する場合も多いですが。
CanGetSignalは、感度を5~10倍上げるような印象です。
全く同じ組成で自作もできますが、PBSTに5%PEG6000(8000)+0.01%カゼインナトリウムを添加するだけでも効果あります。
特許文書によるとCanGetSignalは塩濃度を変えているようです。

(無題) 削除/引用
No.7347-2 - 2018/10/25 (木) 16:28:22 - み
本質ではないでしょう。
ポジコンは無いのですか?
BSAはバックグラウンドが高くなるかも。skim milkでじゅうぶん。

ウェスタン検出 削除/引用
No.7347-1 - 2018/10/25 (木) 16:01:34 - ちゃ
ウェスタンの検出に関する質問です。
データシートに抗体希釈をcangetで行うと書いてありましたが、研究室に無かったため、ブロッキング液である5%milkで希釈しました。
検出すると、全くバンドが出ません。
やはり、cangetとmilkでは検出感度がだいぶ違うのでしょうか?
BSAだと少しマシなどはあるのでしょうか

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