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Zebrafishへのモルフォリノ・mRNAのインジェクション トピック削除
No.7393-TOPIC - 2018/11/09 (金) 07:17:55 - さかな初心者
こんにちは。いつもサイトでは勉強をさせていただいております。
さて、Zebrafishのinjectionについてご教授頂きたくトピックを作成させて頂きました。

ゼブラフィッシュにモルフォリノをinjectionし、phenotypeを見るとともに、別の遺伝子(下流と思われる)のmRNAをinjectionしてレスキューされるのかを見たいと考えております。

私の理解ではモルフォリノのinjectionは卵黄でもよく、1-2細胞期程度では細胞質へ移行して効果がでる、ということだと考えております。mRNAも同様に卵黄へのinjectionでよいのでしょうか?それともmRNAについては1細胞期の細胞質内へのinjectionが必要なのでしょうか?

これまで所属ラボではZebrafishを使ってきておらず、他の実験の都合上新たに立ち上げることになり周囲にも詳しいものがおりません。
ご教授頂けましたら幸いです。どうぞよろしくお願い申し上げます。
 
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(無題) 削除/引用
No.7393-6 - 2018/11/11 (日) 14:28:08 - mon
モルフォリノの問題点を指摘しておきます。
first.lifesciencedb.jp/archives/9680

(無題) 削除/引用
No.7393-5 - 2018/11/11 (日) 12:30:31 - さかな初心者
>monさま

重ね重ねアドバイスをありがとうございます。
CRISPR/Casが主流になりつつあるということは何となく知っているのですが、共同研究先、先行論文の都合もあり、MOを使うことになりそうです。

(無題) 削除/引用
No.7393-4 - 2018/11/11 (日) 12:13:20 - mon
なお、最近はモルフォリノは使わず、CRISPR-Cas9が主流だと聞きましたよ。

(無題) 削除/引用
No.7393-3 - 2018/11/11 (日) 06:04:25 - さかな初心者
>[Re:2] monさんは書きました :
> 国内のゼブラフィッシュ研究グループは、啓蒙活動も盛んに行っているそうです。相談にも親切にのってくれると思いますので、このフォーラムでお答えが得られないなら、どこかのラボの先生にメールしてみてください(アドレスはHPから探せると思います)。


monさま

アドバイスをありがとうございます。ツテを使いつつお伺いしてみようと思います。今後ともどうぞよろしくお願い申し上げます。

(無題) 削除/引用
No.7393-2 - 2018/11/10 (土) 13:25:47 - mon
国内のゼブラフィッシュ研究グループは、啓蒙活動も盛んに行っているそうです。相談にも親切にのってくれると思いますので、このフォーラムでお答えが得られないなら、どこかのラボの先生にメールしてみてください(アドレスはHPから探せると思います)。

Zebrafishへのモルフォリノ・mRNAのインジェクション 削除/引用
No.7393-1 - 2018/11/09 (金) 07:17:55 - さかな初心者
こんにちは。いつもサイトでは勉強をさせていただいております。
さて、Zebrafishのinjectionについてご教授頂きたくトピックを作成させて頂きました。

ゼブラフィッシュにモルフォリノをinjectionし、phenotypeを見るとともに、別の遺伝子(下流と思われる)のmRNAをinjectionしてレスキューされるのかを見たいと考えております。

私の理解ではモルフォリノのinjectionは卵黄でもよく、1-2細胞期程度では細胞質へ移行して効果がでる、ということだと考えております。mRNAも同様に卵黄へのinjectionでよいのでしょうか?それともmRNAについては1細胞期の細胞質内へのinjectionが必要なのでしょうか?

これまで所属ラボではZebrafishを使ってきておらず、他の実験の都合上新たに立ち上げることになり周囲にも詳しいものがおりません。
ご教授頂けましたら幸いです。どうぞよろしくお願い申し上げます。

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