Bio Technical フォーラム

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小さいウェルの培地交換について トピック削除
No.7452-TOPIC - 2018/12/02 (日) 10:58:50 - jtpm
題名の通り小さい(24や48)ウェルの培地交換についての質問です。

交換の際に細胞が剥がれるのを防ぎたいです。
実験の都合上交換の前後で異なる培地を使用するため、すべての培地を取り除き交換しなければなりません。

マイクロピペットで一度に吸うのではなく、少量ずつ吸ってみたりと工夫はしているのですがどうやら少し剥がれているようです。

みなさんが工夫していることがあれば教えてください。
 
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そっと 削除/引用
No.7452-7 - 2018/12/03 (月) 06:14:57 - そっと
実体顕微鏡で見ながら、そっと入れるのが、ベストです。
液を全て交換せず、少し残すのも大事です。

(無題) 削除/引用
No.7452-6 - 2018/12/02 (日) 15:48:43 - おお
確かに剥がれやすい細胞ではありますが、、、

ちょっと実験の内容がわからないので参考にならないかもしれませんが、培地を完全に吸い取るというのは乾燥の原因にもなりますし、逆に見た目完全に吸い取ったとしても程度の問題かもしれませんがキャリーオーバーがないわけがないのく、厳密にいうと吸い取って違う培地を加えたとしても必ずいくらかは持ち越しがあるといえます。

どうしてもそういうのを避けるなら、8割ぐらい吸い取ってPBS(剥がれやすいのでMg,Ca入を使うといいでしょう)をいれてもう一度8割ぐらい吸い取ってなどしながら許容範囲までキャリーオーバーを希釈していくのが一つの方法かと思います。PBSの代わりに交換すべき培地でやってもいいかと思います。

(無題) 削除/引用
No.7452-5 - 2018/12/02 (日) 15:47:23 - mon
コンタミを防ぐため抗生物質添加(カナマイシンとかゲンタシン)が必須となりますが、軽く70%アルコールを吹いておいた綺麗な吸収パッドに(培地が隣のウェルに落ちないようにある程度のスピードで)プレートを逆さに伏せて30秒ほど置く、という方法を使ったことがあります。
ただし乾燥を防ぐため(細胞が剥がれない程度に)素早く壁面から培地を加えてください。

(無題) 削除/引用
No.7452-4 - 2018/12/02 (日) 13:33:34 - jtpm


やはりコーティングするのが確実ですか。

細胞はNIH3T3およびMC3T3です。

(無題) 削除/引用
No.7452-3 - 2018/12/02 (日) 12:06:21 - Morarity
細胞の名前は明かせられますか?

(無題) 削除/引用
No.7452-2 - 2018/12/02 (日) 11:34:16 - おお
PLLなどでコートしたものは使えませんか?

小さいウェルの培地交換について 削除/引用
No.7452-1 - 2018/12/02 (日) 10:58:50 - jtpm
題名の通り小さい(24や48)ウェルの培地交換についての質問です。

交換の際に細胞が剥がれるのを防ぎたいです。
実験の都合上交換の前後で異なる培地を使用するため、すべての培地を取り除き交換しなければなりません。

マイクロピペットで一度に吸うのではなく、少量ずつ吸ってみたりと工夫はしているのですがどうやら少し剥がれているようです。

みなさんが工夫していることがあれば教えてください。

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