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(無題) 削除/引用 No.7472-2 - 2018/12/11 (火) 02:26:29 - おお バックグランドを抑えないと結論付けるのは難しいと思います。 PCRがワークしているかは配列を確認するなどの作業が必要でしょう。 ただしワークしていても非特異的なビーズなどへの結合が起こりやすい部分と重なっているかもしれませんので、少し場所をずらしたりしてプライマーを作ってバックグランドが低いものを探すのも一つのやり方かと思います。

ChIP assay 削除/引用 No.7472-1 - 2018/12/10 (月) 20:36:02 - pnk ChIPアッセイの結果の判断に困っています。 核内受容体Ｘの抗体(と、ネガコンとしてnormal igG)を用いてクロマチン免疫沈降を行い、得られたサンプルを鋳型に半定量ＰＣＲを行いました。 核内受容体Ｘが結合すると分かっている配列の前後で作成したプライマーを用いたＰＣＲの結果は、ネガコンのバンドはうっすらと、Ｘの抗体を用いたサンプルでは数倍のバンドが確認できました。(実験系はワークしていると思われます。) しかし、今回調べたかった配列の前後で作成したプライマーを用いたＰＣＲでは、ネガコンのバンドがしっかり出て、Ｘの抗体を用いたサンプルではバンドが薄くしか確認できません。 これは、単純に今回調べた配列にＸが結合していないということでよいのでしょうか。それとも、プライマーの問題等で本来行いたいＰＣＲができていないのでしょうか。(そのような経験はありますか。)ネガコンが高いことが気になり、単にＸが結合しないとも言い切れなくて、困っています。結果の判断や、何か気づいた点がありましたら教えてください。

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