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Fcタンパク質で細胞をマグネットソート トピック削除
No.7591-TOPIC - 2019/01/22 (火) 01:49:03 - 陽の月
いつも勉強させてもらっています。

私はあるヒトFc組み換え融合タンパク質を用いて、それが結合する細胞を不死化血球細胞からソートしたいです。
不死化血球細胞の0.1%でそのタンパク質を結合する集団が含まれています。

FACSで何度かソーティングを試みたのですが、細胞の生存率の割合が悪く、そこでマグネティックソートでがっつりまずは濃縮をし、その後増えてきたらFACSをと考えています。

私はマグネティックソートはしたことはこれまでにはなく、磁気板もChIPの時に細胞のライセートからプルダウンしたくらいです。

質問は2つありまして、

1. 抗ヒト抗体-磁気ビーズを買うべきか、protein-A-磁気ビーズを買うべきかどちらがいいかなどありますか?価格は後者の方が安そうですが...。

2. ChIPやライセートの免疫沈降用の磁気ビーズと、細胞をソートするようの磁気ビーズとで場合わけありますでしょうか?

今、NEBのプロテインAー磁気ビーズを見ていて、価格も安いですし、ChIPにも用いており信頼がありますし、ただ細胞をソートするアプリケーションが書かれていませんでした。

やはりMACSというとメルティニーさんが思い浮かびますが、細胞用だとケアする部分というのはあるのでしょうか?あと、ソートしたのち、磁気ビーズを一緒にプレートにまくんですよね。その際、ビーズから細胞を剥がす処理というのはするのでしょうか?

大変稚拙な内容で恐縮ですが、ご教示いただけますと有り難いです。
宜しく御願い致します。
 
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Fcタンパク質で細胞をマグネットソート 削除/引用
No.7591-1 - 2019/01/22 (火) 01:49:03 - 陽の月
いつも勉強させてもらっています。

私はあるヒトFc組み換え融合タンパク質を用いて、それが結合する細胞を不死化血球細胞からソートしたいです。
不死化血球細胞の0.1%でそのタンパク質を結合する集団が含まれています。

FACSで何度かソーティングを試みたのですが、細胞の生存率の割合が悪く、そこでマグネティックソートでがっつりまずは濃縮をし、その後増えてきたらFACSをと考えています。

私はマグネティックソートはしたことはこれまでにはなく、磁気板もChIPの時に細胞のライセートからプルダウンしたくらいです。

質問は2つありまして、

1. 抗ヒト抗体-磁気ビーズを買うべきか、protein-A-磁気ビーズを買うべきかどちらがいいかなどありますか?価格は後者の方が安そうですが...。

2. ChIPやライセートの免疫沈降用の磁気ビーズと、細胞をソートするようの磁気ビーズとで場合わけありますでしょうか?

今、NEBのプロテインAー磁気ビーズを見ていて、価格も安いですし、ChIPにも用いており信頼がありますし、ただ細胞をソートするアプリケーションが書かれていませんでした。

やはりMACSというとメルティニーさんが思い浮かびますが、細胞用だとケアする部分というのはあるのでしょうか?あと、ソートしたのち、磁気ビーズを一緒にプレートにまくんですよね。その際、ビーズから細胞を剥がす処理というのはするのでしょうか?

大変稚拙な内容で恐縮ですが、ご教示いただけますと有り難いです。
宜しく御願い致します。

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