Bio Technical フォーラム

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コロニーが出なくなりました。 トピック削除
No.7639-TOPIC - 2019/02/01 (金) 10:58:50 - 大腸菌マン

今現在、クローニングベクターを作製中なのですが、
前回は50まいくろLのコンピに5まいくろLのDNAを入れ、ヒートショックをして
コロニーがたくさん生えていましたが、
新しく買いなおしたコンピ25まいくろLに2.5まいくろLのDNAを入れ、ヒートショック
を行いましたが、コロニーが生えなくなってしまいました。
付属のpUC118のポジコンは25まいくろLのコンピに1まいくろL入れましたが、
3,4個ほどしか出ていない状況です。
何がいけないのかどなたかご教授お願いいたします。
 
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(無題) 削除/引用
No.7639-3 - 2019/02/01 (金) 11:18:40 - おお
>付属のpUC118のポジコンは25まいくろLのコンピに1まいくろL入れましたが、
3,4個ほどしか出ていない状況です。

あまりにも科学的に不正確なのですが、確かにこの記述から何かおかしいとおもいます。

新しく買い直したということですが、ポジコンがうまく行かないことが手技的に確かならメーカーまたは購入した代理店に問い合わせたほうがいいでしょう。

使った抗生物質はどうかとか培地がちゃんとワークしているかとか、ヒートショックようのWater bathなどがだれかの実験のさい温度設定をかなり高くされていて気が付かないで使ってしまったとか、ちょっと手技的な面でも見直してみてください。

(無題) 削除/引用
No.7639-2 - 2019/02/01 (金) 11:09:45 - asan

マイクロLといっても濃度によって変わるのであんまりとりとめのない話何ですが、あなたのいってることを総合的に解釈すると、自分はコンピの保存状態が悪かったとかでへたってるのかな?と疑います。

あとは、抗生物質を間違えたとかかなり初歩的なミスとか。

plasmid vectorを大腸菌に入れるのなんてヒートショックとか全くやらずに、かなり大雑把にやってもたくさん増えてきますよ。

コロニーが出なくなりました。 削除/引用
No.7639-1 - 2019/02/01 (金) 10:58:50 - 大腸菌マン

今現在、クローニングベクターを作製中なのですが、
前回は50まいくろLのコンピに5まいくろLのDNAを入れ、ヒートショックをして
コロニーがたくさん生えていましたが、
新しく買いなおしたコンピ25まいくろLに2.5まいくろLのDNAを入れ、ヒートショック
を行いましたが、コロニーが生えなくなってしまいました。
付属のpUC118のポジコンは25まいくろLのコンピに1まいくろL入れましたが、
3,4個ほどしか出ていない状況です。
何がいけないのかどなたかご教授お願いいたします。

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